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将转座子标签法应用于水稻,构建水稻插入群体,是进行水稻功能基因组学研究的重要手段。本论文研究在玉米转座子Ds的基础上,利用双元表达载体构建了一个带有质粒拯救系统的Activator/Dissociation(简称Ac/Ds)激活转座子作为插入标签,通过农杆菌转入水稻,经分子生物学方法检测,获得了分别含Ac和Ds的单拷贝株系,进行了Ac和Ds的去雄杂交以扩大突变群体,为克隆基因研究水稻基因组打下了很好的基础。获得主要结果如下:
构建了基于Ac和Ds结构的载体,用于水稻插入群体的建立。其中Ds是含有激活标签、基因捕获器结构和质粒拯救系统的载体,利用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导的方法将载体转化粳稻品种中花17的胚性愈伤组织,获得了35个转Ac载体的独立株系,获得了8个转Ds的独立株系。PCR检测结果表明,含Ac和Ds的转基因株系全部呈阳性。Southern杂交获得了15个Ac单拷贝独立株系,4个Ds单拷贝独立株系。表明转座子Ac/Ds确已整合到水稻基因组中并可稳定遗传给子代,对单拷贝株系Ac/Ds进行了大田去雄杂交,以扩大突变群体。
对分别转Ac和Ds的粳稻品种秀水11的杂交后代进行了抗性筛选,获得了具有明显抗稻瘟病菌反应的株系,为筛选抗病突变体提供了可能。