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分子靶向治疗是一种高效低毒的肿瘤治疗方法,可显著改善肿瘤患者的存活率和生存期。然而,其药物疗效因肿瘤个体差异而不同,发生耐药性的患者将无法从靶向药物中获益。PIK3CA在多种人类肿瘤中具有较高的突变率,携带PIK3CA突变的患者会对抗EGFR或抗HER2靶向药物耐药,而对P13K抑制剂敏感。因此,PIK3CA突变检测成为实现肿瘤个体化治疗的重要预测因子。肿瘤基因突变多为发生在实体瘤中的体细胞突变,突变型DNA往往混杂在大量的野生型基因组背景中,给肿瘤基因突变检测带来了挑战。因此,探索肿瘤稀有突变富集检测技术,提高检测方法选择性具有重要意义。本论文以PIK3CA突变检测为研究对象,以提高突变检测选择性为研究目标,结合多色探针熔解曲线技术(Multicolor melting curve analysis,MMCA)和锁核酸(Lockednucleic acid,LNA)修饰技术,探索稀有突变富集检测新方法,建立并比较了两个PIK3CA突变检测体系。第一个体系,在MMCA技术的基础上,融入LNA修饰技术,同时探针采用looping out设计,以提高探针对错配碱基的敏感性,从而提高体系检测选择性。最终建立了一管双色可同时检测PIK3CA外显子9和外显子20上至少十种突变类型的LPO-MMCA体系,选择性达0.05%-0.5%。最后我们使用该体系检测了162份冰冻组织临床样本,检测结果用Sanger测序和数字PCR加以验证,并与实验室之前建立的普通LNA-MMCA体系进行对比。162份标本中LPO-MMCA体系共检测到38份突变,包括13份结直肠癌标本(13/115,11.3%)和25份乳腺癌标本(25/47,53.1%),比Sanger测序多检出14份,比LNA-MMCA体系多检出1份,LPO-MMCA体系具有更高的选择性,可提高阳性标本检出率。第二个体系,首先采用非荧光标记LNA寡核酸作为阻抑子,对突变模板进行预富集,之后采用普通MMCA体系对预富集产物进行检测。最终建立了两步法BK-MMCA体系,可同时分析PIK3CA外显子9和外显子20上的至少九种突变类型,选择性达0.05%-0.5%。使用该体系对162份冰冻组织临床样本进行检测,并与LPO-MMCA体系检测结果进行对比,不一致标本通过数字PCR方法验证。最终共检测到13份阳性结直肠癌标本(13/115,11.3%)和26份阳性乳腺癌标本(26/47,55.3%),其中BK-MMCA体系较LPO-MMCA体系多检出一份乳腺癌标本。在结直肠癌和乳腺癌样本中LPO-MMCA和BK-MMCA检测一致率分别为98.3%(113/115)和97.9%(46/47),两体系一致性良好。综上,本文探索了PIK3CA稀有突变富集检测新技术,建立的两种突变富集检测方法均具有较高的选择性。这些方法快速简便,操作简单,成本低廉,适合临床推广应用。本论文用到的检测方法也有望应用于其他肿瘤相关基因稀有突变检测中,帮助患者实现更精准的个体化治疗。