富血小板血浆对骨缺损区非血管化结构性移植骨再血管化与骨改建实验研究

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目的:通过建立动物骨缺损实验模型,观察不同频次使用富血小板血浆(PRP)对骨缺损区非血管化结构性植骨血管化以及骨改建的影响。方法:实验选取45只新西兰大白兔,6-8月龄,体重2.0-2.5kg,随机分为A、B、C三组,每组15只。A组为对照组,B组为使用一次PRP组,C组为多次使用PRP组。B、C两组采用局麻下切开,用加有抗凝剂试管采股静脉血5ml,用二次离心法制作PRP,并分别对全血和PRP中血小板计数。PRP使用前需要按4:1比例加入激活剂(含有1ml10%氯化钙和1000u凝血酶)制成PRP凝胶。三组实验动物分别建立桡骨中上段1cm骨缺损模型,实验动物随机选择左侧或者右侧桡骨,连同骨膜一起切除桡骨中上段1cm,制造节段性骨缺损,并于同侧取自体髂骨植入缺损区。A组单植入自体髂骨,B组植入加有激活剂的PRP和髂骨混合物,C组植入加有激活剂的PRP和髂骨混合物。并于术后1、3、5周,C组于骨缺损区注射0.5ml加有激活剂的PRP,A、B两组只注射等量的激活剂。分别于术后2、4、8周时处死实验动物,各组随机处死5只,分别对标本进行大体标本观察,X线摄片,病理切片HE染色和免疫组化CD34染色观察。对X线结果依据Lane-Sandhu骨移植X线评分标准评分,对病理切片进行图像分析,测量新生骨面积百分比,CD34染色计数微血管密度。结果:全血中血小板平均浓度为325.25×109/L,PRP中平均血小板浓度为1308×109/L,PRP中血小板计数是全血中血小板计数的4.02倍。术后2周,三组大体标本观察无明显差异,X线摄片未见明显骨痂生成,骨移植X线评分为0分。B、C组新骨形成、新生血管密度均高于A组(PA-B=0.001,PA-C=0.001),C组与B组新生骨百分比差异无统计学意义(PB-C=0.089),C组新生血管密度高于B组(PB-C=0.018)。术后4周B、C两组骨放射学评分高于A组(PA-B=0.047,PA-C<0.001),C组放射学评分高于B组(PB-C=0.024), B、C两组新生骨痂百分比高于A组(PA-B<0.001,PA-C<0.001),C组新生骨痂百分比高于B组(PB-C=0.03),B、C两组新生血管密度高于A组(PA-B<0.001,PA-C<0.001),C组新生血管密度高于B组(PB-C=0.002)。术后8周,B、C两组骨放射学评分高于A组(PA-B=0.001,PA-C<0.001),C组放射学评分与B组差异无统计学意义(PB-C=0.827),B、C两组新生骨痂百分比高于A组(PA-B=0.001,PA-C<0.001),C组新生骨痂百分比高于B组(PB-C=0.035),B、C两组新生血管密度高于A组(PA-B<0.001,PA-C<0.001),C组新生血管密度与B组差异无统计学意义(PB-C=0.82)。结论:1.PRP有促进兔桡骨骨缺损早期修复的作用。2.多频次骨缺损区注射PRP,有利于非血管化结构性植骨的再血管化和骨改建。
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