花生是世界粮农组织(FAO，1995)认定的八大类食物过敏原之一。相对其它食物过敏而言，花生过敏发生率较高、临床症状更为严重，且不容易随年龄的增长而产生免疫耐受，在公共卫生和食品安全领域倍受人们的关注。因此，建立准确、灵敏、快速地检测花生过敏原的方法具有重要意义。 本研究主要内容包括花生过敏原．Ara h2的分离纯化、兔抗Ara h2多克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测Ara h2方法的建立。 研究中以四粒红花生(Arachis hypogaea L.)为实验对象，经粉碎、脱脂、蛋白抽提、阴离子交换层析、SDS-PAGE电泳回收，得到了电泳纯(纯度>95％)的Ara h2纯品，建立了DEAE-Sepharose Fast Flow结合SDS-PAGE电泳回收分离Am h2的方法。 在制备抗Ara h2抗体过程中，以纯化的Ara h2为抗原，初次免疫采用弗式完全佐剂，加强免疫采用弗式不完全佐剂，皮下多点免疫，每隔两周加强免疫一次，共计免疫6次，每次免疫剂量为200μg/只。首次免疫12周后，经ELISA检测和双向琼脂扩散法检测，抗体效价分别为1:200000及1:16。双向琼脂扩散的交叉试验表明，Ara，h2特异性好，与大豆蛋白、鸡蛋清蛋白、BSA均无交叉反应。此实验建立了间接ELISA检测．Am h2抗体效价的检测方法及制备抗Ara h2多克隆抗体的操作程序。 在用板外竞争反应模式建立Ara h2的间接竞争ELISA检测方法过程中，用160ng/mL抗原包被酶标板(37℃包被2小时)，以5％脱脂奶粉37℃封闭1小时，选择抗血清稀释度为1:16000。该方法的检测灵敏度为51ng/mL，最低检出限为0.26ng/mL，样品加标回收率为90％-100％，检测Ara h2的线性范围在12.5ng/ml～400ng/mL之间。同时，用此方法对6份样品进行了检测，测得花生牛奶饮料中Ara h2含量为812mg/kg，其它样品中未检出Ara h2。