RIPK4表达与舌鳞癌临床特点及生物学特性之间的关系

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目的口腔鳞状细胞癌(OSCC)是全球第六大常见癌症[¨,主要发生在舌、颊、牙龈、腭、上颌窦。临床以舌鳞状细胞癌(TSCC)最常见,其五年生存率较低(48.0%-70.9%),肿瘤局部控制率也较低[4]。目前对TSCC的肿瘤发生的机制尚不清楚。RIPK4(Receptor-interacting serine/threonine kinase protein4)首次发现于酵母双杂交实验中蛋白激酶C (PKC) β1和PKC δ交互的一种蛋白。不正常的表皮细胞分化导致RIPK4缺陷小鼠围产期死亡。RIPK4-/-小鼠表皮棘突层和颗粒层增厚,从而使表皮增厚,在最外层含有角化不全细胞,而不是无核鳞状上皮细胞。RIPK4可自发调控表皮细胞的分化。RIPK4是一种锚蛋白,含有重复序列的蛋白激酶,在细胞分化和皮肤炎症[11-13]中是必不可少的。本研究的目的是探索RIPK4表达与舌鳞癌临床特点及其生物学特性的关系。方法本研究收集的109例组织标本取自浙江大学医学院附属第一医院口腔颌面外科及病理科,2006年1月至2012年12月期间手术切除并经病理证实。其中有73例舌鳞状细胞癌患者的癌组织及36例与其相对应舌部手术切除的癌旁正常组织。根据WHO病理分级标准,这些舌癌患者中有32例为高分化肿瘤,23例中分化肿瘤,18例低分化肿瘤。其中有20例发生淋巴结转移。所有的患者手术前均未接受过放疗,化疗,或任何其他介入性姑息治疗等抗肿瘤治疗,并经过了当地伦理委员会的批准。所有标本为肿瘤的中心部分并粉碎在液氮冷研钵或固定在10%福尔马林中并包埋在石蜡中。临床收集患者的性别,年龄,学历,饮酒、抽烟习惯,高血压、糖尿病病史,及是否有淋巴结转移等相关参数。石蜡包埋切片,兔抗RIPK4单克隆抗体免疫组织化学染色,并用多元回归分析RIPK4表达水平与肿瘤分化程度及各种临床特点是否存在关联。人舌鳞癌细胞系TCA-8113转染pRIPK4或pRIPK4-shRNA质粒后,对其表达量做荧光实时定量PCR检测]mRNA表达,Western Blot检测RIPK4蛋白水平表达变化。划痕实验和细胞侵袭实验观察RIPK4表达改变后细胞迁移能力和细胞侵袭能力是否改变。结果RIPK4在癌旁正常组织和正常舌上皮细胞中正常表达。高分化肿瘤RIPK4表达水平高,低分化RIPK4表达水平明显下降,高分化舌鳞癌的RIPK4的平均分值为2,中分化为1.2,低分化为0.54。癌旁正常组织RIPK4mRNA水平均高于不同分化程度舌鳞癌。表明RIPK4水平与舌鳞癌分化程度显著相关。RIPK4水平与患者年龄相关(r=0.66,P=0.04),患者31~55岁平均值为1.13,56~69岁平均值为1.65(R=0.03,P<0.01)。RIPK4水平和性别之间有显著的关联。男性有较高RIPK4水平(P=0.03,卡方检验)。而教育程度,酗酒,吸烟,糖尿病,高血压和淋巴结转移对RIPK4水平没有影响。我们转染pRIPK4,pNC-shRNA,或pRIPK4-shRNA的进入TCA-8113细胞。四组不同的RIPK4转染率均大于60%,并没有表现出任何的统计学意义。对RIPK4mRNA的表达,TCA-8113的侵袭和迁移能力进行了测定,发现RIPK4表达下降后其迁移和侵袭能力显著增加。这些结果表明,RIPK4在舌鳞癌细胞系TCA8113的迁移和侵袭中起重要作用。共聚焦激光扫描图像显示,正常舌组织和NOK细胞胞浆中RIPK4强烈表达,而在舌鳞癌样品和TCA8113细胞中其表达水平显著下降。结论1舌鳞癌上皮细胞分化程度越低RPK4水平越低。2RIPK4与年龄呈正相关,同时男性有更高的表达水平。3RIPK4下降可增强舌鳞癌上皮细胞TCA-8113的迁移和侵袭能力。
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