【摘 要】
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联会复合体3（synaptonemal complex 3,scp3）和DNA减数分裂重组酶1（DNA meiotic recombinase 1,dmc1）是减数分裂过程中两个关键因子。为了研究其在南方鲇减数分裂过程中的表达和功能,本实验以30dah（days after hatching,dah）、55dah、90dah的南方鲇鱼苗为实验对象。应用PCR技术对南方鲇scp3和dmc1基因CDS
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联会复合体3（synaptonemal complex 3,scp3）和DNA减数分裂重组酶1（DNA meiotic recombinase 1,dmc1）是减数分裂过程中两个关键因子。为了研究其在南方鲇减数分裂过程中的表达和功能,本实验以30dah（days after hatching,dah）、55dah、90dah的南方鲇鱼苗为实验对象。应用PCR技术对南方鲇scp3和dmc1基因CDS序列进行克隆;利用生物信息学对DMC1和SCP3蛋白的结构、理化性质进行分析预测;利用RT-PCR和Real-PCR方法研究scp3和dmc1在9种不同组织和三个不同日龄的表达情况,采用免疫荧光技术确定DMC1和SCP3在卵巢中的定位,采用GST pull down技术验证两蛋白是否具有相互作用。其研究结果如下:1.南方鲇scp3（NCBI登录号为:MW075231）和dmc1（NCBI登录号为:MF770581）的编码区序列（Coding Sequence,CDS）为723bp和1029bp,分别编码240和342个氨基酸。DMC1的分子量为37.96k D,理论等电点为5.65,分子式为C1673H2674N458O515S16,无信号肽和跨膜结构,二级结构包括α螺旋为50.58%,β折叠为5.26%,无规则卷曲为29.24%,延伸链为14.91%。SCP3的分子量为27.88k D,理论等电点为8.92,分子式为C1207H1962N346O384S13,不存在信号肽和跨膜结构,二级结构包括α螺旋为74.58%,β折叠为0.42%,无规则卷曲为24.17%,延伸链为0.83%。同源比对结果显示南方鲇DMC1与斑点叉尾鮰和黄颡鱼的同源性高达97%,与虹鳟、斑马鱼、青鳉的同源性高达92%。南方鲇SCP3与黄颡鱼和斑点叉尾鮰的同源性分别为89.17%、87.92%,与虹鳟和斑马鱼的同源性为别为78.42%、73.44%。系统进化分析中,南方鲇SCP3和DMC1与其他鱼类聚成一支,然后与四足类聚成一支。2.在南方鲇雌鱼的研究中,scp3和dmc1仅在卵巢中表达,在其脑（B）、肠（I）、心（H）、鳃（G）、肝脏（L）、肾（K）、肌肉（Mu）、脾（S）等组织中不表达,且两基因在55dah表达量最高。SCP3在南方鲇卵母细胞的细胞核和细胞质中有较强的阳性信号,DMC1在卵母细胞核中有较强的阳性信号。3.在GST pull-down实验中,用GST抗体检测对照组（CK,GST+谷胱甘肽-琼脂糖树脂+HIS-DMC1）、实验组（Exp,GST-SCP3+谷胱甘肽-琼脂糖树脂+HIS-DMC1）、GST蛋白、GST-SCP3重组蛋白和HIS-DMC1重组蛋白,结果显示,在实验组和GST-SCP3重组蛋白中检测到分子量为50 k D的目的条带;用HIS抗体检测对照组（CK）、实验组（Exp）、GST蛋白、GST-SCP3重组蛋白和HIS-DMC1重组蛋白,结果显示,在实验组和HIS-DMC1重组蛋白中检测到分子量为42 k D目的条带。上述结果说明GST抗体成功富集了诱饵蛋白GST-SCP3,诱饵蛋白GST-SCP3拉下了猎物蛋白HIS-DMC1,表明GST-SCP3和HIS-DMC1存在体外相互作用。
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