草苁蓉乙醇提取物对大鼠非酒精性脂肪性肝病的保护作用及机制的初步探讨

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非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)为代谢综合症的重要组分之一,其在肥胖、高脂血症和2型糖尿病人群中有着相当高的发病率,已成为全球普遍关注的医学问题和社会问题。目前,NAFLD的发病机制尚未完全阐明,缺乏有效的治疗药物。草苁蓉(boschniakia rossica Fedtsch et Flerov,BR)具有调节免疫、抗脂质过氧化及清除自由基、抗炎及抗肿瘤作用、增强受损伤的肝枯否细胞免疫活性等作用。BR对NAFLD有无保护作用尚不清楚。本实验通过建立实验大鼠NAFLD模型,初步探讨了草苁蓉乙醇提取物(Boschniakia rossica ethanol extract,BREE)对NAFLD的保护作用及部分机制。  方法:  1.实验分组:50只清洁级SD大鼠(体重:180±20 g)随机分为5组:正常对照组、模型对照组、实验药物高、中、低剂量组。正常对照组以普通饲料喂养,其余4组均以改良氨基酸及胆碱缺乏(CDAA)的饲料喂养,共计8周。实验第2周始,实验药物高、中、低剂量组分别按大鼠体重每日给予500mg/kg、250mg/kg、125 mg/kg BREE,以5ml生理盐水溶解后灌胃,模型组与正常组给予等量生理盐水灌胃。第8周末,所有实验大鼠禁食水12h后,水合氯醛麻醉下,经门静脉抽血5ml,常规制备血清;取出肝脏并称重;留取肝脏左叶组织2块,分别制备免疫组化和病理组织标本。  2.检测指标:采用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、TBA值;ELISA法测定血清TNF-α值;免疫组化染色观察CYP2E1、α-SMA、TGF-β1及 TIMP-1的表达;HE染色观察肝组织病理变化。  3.统计分析:检测结果以(X±s)表示,用SPSS10.0软件进行数据分析,各组间比较用t检验,多组间比较用方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。  结果:  1. BREE对SD大鼠NAFLD的保护作用  高剂量BREE组血清ALT、AST、TBA的水平(41.31±12.32 U/L、42.12±6.32 U/L、68.20±32.62μmmol/L)显著低于模型组(67.92±1.28 U/L、74.12±5.20 U/L、129.56±23.12μmmol/L),具有显著性差异,(P<0.01)。  2. BREE对SD大鼠NAFLD肝组织CYP2E1表达的影响  高剂量BREE组肝组织CYP2E1表达水平(5.30±2.62)显著低于模型组(1.20±0.44),具有显著性差异,(P<0.01)。  3. BREE对SD大鼠NAFLD血清TNF-α水平的影响  高剂量BREE组血清TNF-α水平(70.04±12.62 ng/L)低于模型组(31.20±2.44 ng/L),具有统计学意义,(P<0.05)。  4. BREE对SD大鼠NAFLD肝组织中α-SMA、TGF-β1及 TIMP-1表达的影响  肝组织α-SMA、TGF-β1及 TIMP-1在模型组均呈阳性表达,BREE组及正常组均呈阴性表达。  5. BREE对SD大鼠NAFLD病理组织学的影响  模型组肝组织呈重度脂肪变性及坏死,汇管区大量炎症细胞浸润,未见纤维间隔形成;而不同剂量BREE组的肝细胞变性、坏死及炎症细胞的浸润呈不同程度的改善。  结论:  本实验结果表明,BREE对改良CDAA诱导的实验SD大鼠NAFLD有明显的保护作用。其机制可能与下调肝组织CYP2E1表达,减少血清TNF-α有关。 BREE对CDAA诱导的实验大鼠NAFLD肝组织α-SMA、TGF-β1及 TIMP-1的表达有抑制作用。
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