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非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)为代谢综合症的重要组分之一,其在肥胖、高脂血症和2型糖尿病人群中有着相当高的发病率,已成为全球普遍关注的医学问题和社会问题。目前,NAFLD的发病机制尚未完全阐明,缺乏有效的治疗药物。草苁蓉(boschniakia rossica Fedtsch et Flerov,BR)具有调节免疫、抗脂质过氧化及清除自由基、抗炎及抗肿瘤作用、增强受损伤的肝枯否细胞免疫活性等作用。BR对NAFLD有无保护作用尚不清楚。本实验通过建立实验大鼠NAFLD模型,初步探讨了草苁蓉乙醇提取物(Boschniakia rossica ethanol extract,BREE)对NAFLD的保护作用及部分机制。 方法: 1.实验分组:50只清洁级SD大鼠(体重:180±20 g)随机分为5组:正常对照组、模型对照组、实验药物高、中、低剂量组。正常对照组以普通饲料喂养,其余4组均以改良氨基酸及胆碱缺乏(CDAA)的饲料喂养,共计8周。实验第2周始,实验药物高、中、低剂量组分别按大鼠体重每日给予500mg/kg、250mg/kg、125 mg/kg BREE,以5ml生理盐水溶解后灌胃,模型组与正常组给予等量生理盐水灌胃。第8周末,所有实验大鼠禁食水12h后,水合氯醛麻醉下,经门静脉抽血5ml,常规制备血清;取出肝脏并称重;留取肝脏左叶组织2块,分别制备免疫组化和病理组织标本。 2.检测指标:采用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、TBA值;ELISA法测定血清TNF-α值;免疫组化染色观察CYP2E1、α-SMA、TGF-β1及 TIMP-1的表达;HE染色观察肝组织病理变化。 3.统计分析:检测结果以(X±s)表示,用SPSS10.0软件进行数据分析,各组间比较用t检验,多组间比较用方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。 结果: 1. BREE对SD大鼠NAFLD的保护作用 高剂量BREE组血清ALT、AST、TBA的水平(41.31±12.32 U/L、42.12±6.32 U/L、68.20±32.62μmmol/L)显著低于模型组(67.92±1.28 U/L、74.12±5.20 U/L、129.56±23.12μmmol/L),具有显著性差异,(P<0.01)。 2. BREE对SD大鼠NAFLD肝组织CYP2E1表达的影响 高剂量BREE组肝组织CYP2E1表达水平(5.30±2.62)显著低于模型组(1.20±0.44),具有显著性差异,(P<0.01)。 3. BREE对SD大鼠NAFLD血清TNF-α水平的影响 高剂量BREE组血清TNF-α水平(70.04±12.62 ng/L)低于模型组(31.20±2.44 ng/L),具有统计学意义,(P<0.05)。 4. BREE对SD大鼠NAFLD肝组织中α-SMA、TGF-β1及 TIMP-1表达的影响 肝组织α-SMA、TGF-β1及 TIMP-1在模型组均呈阳性表达,BREE组及正常组均呈阴性表达。 5. BREE对SD大鼠NAFLD病理组织学的影响 模型组肝组织呈重度脂肪变性及坏死,汇管区大量炎症细胞浸润,未见纤维间隔形成;而不同剂量BREE组的肝细胞变性、坏死及炎症细胞的浸润呈不同程度的改善。 结论: 本实验结果表明,BREE对改良CDAA诱导的实验SD大鼠NAFLD有明显的保护作用。其机制可能与下调肝组织CYP2E1表达,减少血清TNF-α有关。 BREE对CDAA诱导的实验大鼠NAFLD肝组织α-SMA、TGF-β1及 TIMP-1的表达有抑制作用。