小麦赤霉病是由禾谷镰孢菌（Fusarium graminearum）侵染引起的一种流行性病害,会造成严重的小麦产量损失。此外,小麦赤霉病病原菌还会产生真菌毒素污染小麦,从而严重威胁人畜的生命健康。氰烯菌酯（phenamacril）,是由国家南方农药创制中心江苏基地开发的一种能特效防治小麦赤霉病的新型杀菌剂。前期研究发现,在室内诱导条件下禾谷镰孢菌对氰烯菌酯很容易产生抗性,且禾谷镰孢菌肌球蛋白-5氨基酸点突变是导致禾谷镰孢菌对氰烯菌酯产生抗性的主要原因。为了更好地监测田间可能会出现的禾谷镰孢菌对氰烯菌酯的抗性情况,进一步解释肌球蛋白-5氨基酸点突变导致禾谷镰孢菌对氰烯菌酯产生抗性的原因,本文从以下三个方面做了研究:一、利用PCR-RFLP技术开发出了一种用来检测禾谷镰孢菌对氰烯菌酯抗性情况的快速诊断技术。试验结果表明,分别用Kpn I、Tas I、Dra I酶切的方法可分别将抗性水平不同的不同点突变类型菌株A135T、S217L和E420K与野生型敏感菌株PH-1区分开来。在建立好上述检测方法后,我们用PCR-RFLP技术与传统的菌丝生长速率测定法检测了 48株氰烯菌酯抗性菌株,发现此方法有很高的准确性,而且相对于菌丝生长速率测定法,PCR-RFLP技术更加省时省力。PCR-RFLP技术不仅为监测小麦赤霉病对氰烯菌酯的抗性情况提供了一种更加简洁高效的思路,而且对以后的田间抗性治理也提供了科学依据。二、以禾谷镰孢菌敏感菌株PH-1为初始菌株,构建了 A135T、S217L、S418R、E420K 4种在肌球蛋白-5上定点突变的突变体菌株和带有潮霉素标记的PH-1-HPH对照菌株。然后将点突变抗性菌株和对照菌株PH-1-HPH,进行转录组测序。结果显示:与对照菌株相比,4种定点突变体菌株均有一些基因上调或下调表达。对上述差异表达基因进行GO功能进行分类以及富集分析显示,与对照组相比,4种Myosin-5不同氨基酸点突变体的DEGs GO类别在分子功能、细胞组分和生物过程三大功能类中都有富集。对上述基因进行KEGG生物通路分类以及富集分析显示,与对照组相比,4种Myosin-5不同氨基酸点突变体DEGs的Pathway主要集中在代谢途径、次生代谢产物的生物合成等通路中。进一步分析显示:与对照菌株相比,4种氨基酸点突变体中,共同上调的基因有14个,共同下调的基因有24个,据此猜测上述基因可能与Myoisn-5有相互作用,从而参与了禾谷镰孢菌对氰烯菌酯敏感性的调控。这一结果为我们寻找禾谷镰孢菌调控对氰烯菌酯产生抗性的相关基因提供线索,也为我们进一步阐明禾谷镰孢菌对氰烯菌酯产生抗性的机理提供了基础数据。三、根据转录组数据结果我们选取了在4种氨基酸点突变体中基因表达量共同下调基因FgDbf2和FgMet1进行基因敲除,研究其对氰烯菌酯的敏感性和生物学功能。结果显示:FgDbf2基因敲除会使高抗菌株YP-1中的EC50显著下降,研究其基因功能发现FgDbf2对菌株的生长、生殖、胁迫、致病方面均有影响。FgMet1基因敲除体对氰烯菌酯敏感性无显著影响且对生殖、胁迫、致病等方面无影响,但菌株生长速度变缓。