【摘 要】
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禽白血病（avian leukosis,AL）是一种由禽白血病病毒（ALV）引起禽类发生恶性或良性肿瘤的疾病,主要可引起鸡生产性能下降、免疫抑制、产生肿瘤和引起病鸡死亡。禽网状内皮组织增生症（reticuloendotheliosis,RE）是由禽网状内皮组织增生症病毒（REV）引起的传染性肿瘤性疾病,主要以引起禽类发生肿瘤和免疫抑制为特征。AL和RE都是生产上常见的家禽肿瘤性疾病,经常呈ALV/
【基金项目】
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广东省家禽产业技术体系疾病控制岗位专家（2018LM1114）；
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禽白血病（avian leukosis,AL）是一种由禽白血病病毒（ALV）引起禽类发生恶性或良性肿瘤的疾病,主要可引起鸡生产性能下降、免疫抑制、产生肿瘤和引起病鸡死亡。禽网状内皮组织增生症（reticuloendotheliosis,RE）是由禽网状内皮组织增生症病毒（REV）引起的传染性肿瘤性疾病,主要以引起禽类发生肿瘤和免疫抑制为特征。AL和RE都是生产上常见的家禽肿瘤性疾病,经常呈ALV/A/B/J和REV混合性感染且难以鉴别诊断。ALV和REV都属于反转录病毒,均可诱导宿主产生免疫抑制。本研究拟ALV-B和REV分别单一感染以及共感染DF-1细胞为体外研究模型,比较和分析单一感染组与共感染组在在细胞水平上病毒滴度以及相关细胞因子的变化水平,为研究其共感染条件下宿主对这两种病毒的免疫应答机制打下基础。本研究首先从细胞接种密度、细胞培养血清浓度、培养基、添加抗生素浓度这四个方面采用单因素法经CCK-8法检测细胞增殖状况来优化DF-1细胞培养条件。筛选出6×105个细胞/m L为接种密度、含7.5%FBS的DMEM高糖培养基、添加0.5%浓度为100,000 U/m L的青链霉素混合液作为体外共感染试验时DF-1细胞的培养条件。为了研究ALV-B与REV的体外共感染特点,本研究通过分别检测ALV-B与REV单一感染组及共感染组中ALV-B、REV、IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-α、IFN-β和IFN-γRNA转录水平的变化情况,采用相对定量法常用的2-ΔΔCt法进行分析,比较和分析单一感染组与共感染组在RNA水平、病毒复制水平以及相关免疫因子的变化水平。结果显示,在病毒感染的72 h里,共感染组的ALV-B与REV m RNA转录水平均极显著高于ALV-B和REV单一感染组（P<0.01）,提示ALV-B与REV存在互相促进病毒复制的现象,即这两种病毒在DF-1细胞之间可能有协同感染。与对照组相比,单感染REV对DF-1细胞的IL-2、IFN-α、IFN-β和IFN-γ的表达水平影响相对较小,差异不显著（P>0.05）,IL-6的的表达水平显著高于对照组（P<0.05）,IL-1除在24 h极显著（P<0.01）低于对照组外,其他时间无明显变化（P>0.05）。在病毒感染的72 h内,ALV-B组的IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-α、IFN-β、IFN-γ这6种细胞因子的表达量均显著（P<0.05）或者极显著（P<0.01）高于对照组和REV单感染组。共感染组除IL-1β无明显变化外,IL-2、IL-6、IFN-α、IFN-β、IFN-γ都显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）高于对照组和REV单感染组,共感染组IL-1β和IL-2时的表达量显著低于ALV-B单感染组,IL-6在感染48 h后、IFN-α在感染24 h前的表达量显著高于对照组、ALV-B和REV单感染组（P<0.05）,表示ALV-B和REV共感染可以抑制IL-1和IL-2的表达,对IL-6和IFN-α的表达有促进作用。综上所述,ALV-B与REV在DF-1细胞上具有协同感染性,ALV-B单一感染组和ALV-B与REV共感染对IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-α、IFN-β、IFN-γ这6种细胞因子的影响大于REV单一感染组;ALV-B与REV共感染可以促进DF-1细胞IL-6和IFN-α的表达,而对IL-1β和IL-2的表达有抑制作用。
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