目的:拟在优选溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)造模方法的基础上考察双姜胃痛丸对UC的改善作用,并从Th17/Treg分化调节角度探索双姜胃痛丸的UC作用机制,为其临床新应用的发展提供实验依据。方法:1.造模方法优选:雄性小鼠随机分为正常组、3%自由饮用组、4%自由饮用组、3%灌胃组、4%灌胃组。自由饮用组采用自由饮用对应浓度的葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液造模的方法,灌胃组每天参照对应浓度的自由饮用组,灌胃给予与自由饮用组相同质量的DSS。观察并记录小鼠体重、食量、疾病活动度(DAI)评分及病理切片评分,测量第6天和第10天小鼠结肠长度,称量肝脏、脾脏、肾脏、胸腺重量并计算脏器指数。2.双姜胃痛丸对小鼠UC的改善作用研究:雄性小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组、双姜胃痛丸高、中、低剂量组。自由饮用3%DSS溶液造模,造模的同时开始给药至第10天。观察并记录体重、食量、DAI评分、小鼠血清髓过氧化物酶(MPO)、结肠长度及肝脏、脾脏、肾脏的脏器指数;观察病理切片并评分;ELISA法检测结肠组织中前炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表达。“肉汤”腹腔注射法诱导并制备腹腔巨噬细胞,给予双姜胃痛丸及刺激剂,收集上清后检测前炎因子含量。3.双姜胃痛丸作用机制研究:(1)对UC小鼠结肠及肠系膜淋巴结中Th17/Treg的影响:检测结肠和肠系膜淋巴结中的CD4~+CD25~+foxp3~+与CD4~+IL-17~+细胞数量。(2)体外对Th17/Treg分化的影响及其与PPARγ的关系:取小鼠肠系膜淋巴结细胞,去除贴壁细胞,铺板于含有T细胞增殖诱导剂的细胞培养板中,分为Th17细胞分化诱导组、双姜胃痛丸+Th17细胞分化诱导组、Treg细胞分化诱导组、双姜胃痛丸+Treg细胞分化诱导组,培养4天后收集细胞,检测CD4~+CD25~+foxp3~+与CD4~+IL-17~+细胞数量。(3)对小鼠UC的治疗作用与PPARγ-Th17/Treg的关系:小鼠随机分为模型组、双姜胃痛丸组、双姜胃痛丸+PPARγ阻断剂组、PPARγ阻断剂组,均造模,造模的同时给予对应药物和阻断剂,观察小鼠体重、食量、DAI评分、结肠病理组织切片及结肠中CD4~+CD25~+foxp3~+与CD4~+IL-17~+细胞数量。结果:4种造模方式均成功诱导UC模型,显著降低小鼠体重及结肠长度(P<0.001),升高DAI评分及HE病理切片评分(P<0.001)等;3%、4%灌胃组死亡率分别达25%、50%,饮用组无死亡,且在造模成功后灌胃组DAI评分变异系数与饮用组无较大差别,相对饮用造模不具显著优势;3%饮用组体重及DAI评分于第5天显著高于4%饮用组(P<0.05,P<0.001),其余时间无显著性差异,变异系数除第1天外,其余时间均无较大差异。综合评价3%自由饮用造模严重程度相对较高,死亡率低,方便且节约成本,是本研究中小鼠UC较合适的造模方法。双姜胃痛丸可显著升高模型小鼠体重(P<0.05,P<0.01,P<0.001),显著降低DAI评分、MPO活力和结肠病理组织切片评分(P<0.05,P<0.01,P<0.001),对UC小鼠具有改善作用;可显著降低肝脏与脾脏的脏器指数(P<0.05,P<0.001),对肝脏与脾脏具有保护作用;低剂量可显著降低结肠组织中前炎因子IL-6及IL-1β含量(P<0.05,P<0.01),体外显著降低腹腔巨噬细胞IL-1β和TNF-α含量(P<0.05,P<0.01),具有抗炎作用。双姜胃痛丸可影响UC小鼠结肠和肠系膜淋巴结中的Th17和Treg细胞数量;显著增加肠系膜淋巴结细胞中Treg细胞的分化比例(P<0.001);应用PPARγ受体阻断剂后,双姜胃痛丸对UC的治疗作用消失;且Th17细胞数量升高,Treg细胞数量下降,提示双姜胃痛丸对UC的改善可能与激活PPARγ-调节Th17/Treg有关。结论:3%自由饮用是本研究中小鼠UC的较优造模方法;双姜胃痛丸可显著改善小鼠UC,并表现出脏器保护作用;双姜胃痛丸通过影响PPARγ,从而影响了Th0细胞分化为Th17与Treg细胞过程,从而治疗UC。