研究背景:结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)是最常见的消化道恶性肿瘤之一,在全球癌症发病率中居第3位,死亡率居第4位。死亡率居高不下的主要原因与术后肿瘤的复发和转移密切相关。有研究发现肝肠钙粘连蛋白(Liver-Intestine Cadherin,LI-cadherin,或Cadherin-17,CDH17)在结直肠癌中的异常表达与细胞侵袭、转存在联系,但具体机制不明。既往研究中发现Wnt信号通路参与人类多种肿瘤的侵袭、转移过程,因此明确LI-cadherin是否参与调控Wnt信号通路相关基因的表达,对揭示结直肠癌细胞侵袭、转移的分子机制,以及探寻结直肠癌诊断和防治的新靶点都具有重要意义。目的:通过筛选结肠癌中受LI-cadherin表达影响的Wnt信号通路相关基因,明确LI-cadherin参与结肠癌侵袭转移的可能分子机制。方法:1、培养结肠癌细胞株,构建LI-cadherin-shRNA慢病毒沉默表达载体和LI-cadherin慢病毒阴性对照载体,将慢病毒包装后分别感染LoVo和COLO205细胞,采用RT-qPCR和Western blot在mRNA和蛋白质水平检测LI-cadherin基因沉默效果;筛选沉默LI-cadherin基因的稳定转染细胞株。2、提取实验组和对照组总RNA,逆转录为第一链cDNA,采用PCR Array Wnt信号通路芯片筛选受LI-cadherin调控的Wnt信号通路基因,然后采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法进一步验证。结果:1、成功构建了 LI-cadherin-shRNA慢病毒沉默表达载体和LI-cadherin慢病毒阴性对照载体,获得了慢病毒感染后沉默LI-cadherin基因并稳定转染的结肠癌LoVo和COLO205细胞株;2、应用PCR Array Wnt信号通路芯片在结肠癌LoVo和COLO205细胞中筛选出了 LI-cadherin调控的Wnt信号通路基因,结果表明:在LI-cadherin基因沉默后,Wnt信号通路中有40个相关基因的表达水平发生了显著变化;3、采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法进一步验证和检测PCR Array Wnt信号通路芯片的结果,以明确LI-cadherin基因沉默对Wnt信号通路的影响,结果表明:有18个Wnt信号通路相关基因在mRNA和蛋白质表达水平均显著下调。结论:在LI-cadherin基因沉默表达的结肠癌LoVo和COLO205细胞中,三条Wnt信号通路相关基因的表达均受到了影响,其表达水平发生了显著的变化:经典的 Wnt/β-catenin 通路基因有 7 个发生了变化:APC、AXIN2、GSK3β、FZD1、FZD3、FZD7、TCF7;Wnt/Ca2+通路有 1 个发生了变化:WNT5A;Wnt/PCP 通路有 6 个发生了变化:RHOU、VANGL2、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT9B;另外,Wnt通路受LI-cadherin调控的下游靶基因有4个发生了变化,分别为MYC、CCND1、MMP7、PPARD。Wnt信号通路三条途径均受LI-cadherin调控。