【摘 要】
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目的检测pcDNA3-TGF-β1表达载体瞬时和稳定转染对兔骨髓基质干细胞TGF-β1蛋白表达的影响及其诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞方向分化的可行性,为修复软骨损伤的实验研究提供
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目的检测pcDNA3-TGF-β1表达载体瞬时和稳定转染对兔骨髓基质干细胞TGF-β1蛋白表达的影响及其诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞方向分化的可行性,为修复软骨损伤的实验研究提供实验依据。方法用密度梯度离心法和贴壁法分离纯化骨髓间充质干细胞,并传代扩增后,通过免疫组织化学鉴定细胞。脂质体介导pcDNA3-TGF-β1表达载体转染第三代兔骨髓基质干细胞,免疫组化法检测法检测瞬时TGF-β1蛋白表达。应用G418筛选阳性克隆,同法检测稳定转染组细胞TGF-β1蛋白表达。持续培养各组细胞,连续观察细胞的形态变化并记录其特点,,以未转染空载体细胞为实验对照组,未转染细胞为空白对照组,培养2周、4周后检测各组细胞型Ⅱ胶原的表达情况。结果体外成功建立兔骨髓基质干细胞分离扩增传代的方法。免疫组化结果显示pcDNA3-TGF-β1表达载体瞬时转染后细胞内有TGF-β1蛋白表达。经G418筛选2周,获得稳定表达克隆,免疫组化结果显示：稳定转染组细胞有明显的TGF-β1蛋白表达。；转染细胞第2周,抗Ⅱ型胶原免疫组织化学染色实验组可见细胞内阳性颗粒,实验对照组及空白对照组均为阴性,培养4周后细胞形态变为3角型,实验组有明显Ⅱ型胶原表达。实验对照组及空白对照组均为阴性实验对照组及空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论脂质体法重组pcDNA3-TGF-β1基因可成功转染兔MSCs,转染细胞表达TGF-β1,并可诱导转染细胞分泌Ⅱ型胶原蛋白,表现出软骨细胞样生理特征,并向软骨细胞方向分化。
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