目的：研究重组人粒细胞刺激因子(recombinant human granulocyte colony stimulating factor,rhG-CSF)的下游生产工艺,提高产品的反相高校纯度(RP-HPLC纯度≥97％),提高产品质量,降低成本,形成一个适用于大规模生产的工艺。 方法：优化发酵工艺,发酵中采用流加方法进行补料,采用均浆泵进行菌体破碎,经洗涤获得包涵体,采用稀释法进行复性,在复性液中添加一定浓度的尿素,提高复性中蛋白浓度,超滤方法浓缩复性液,优化获得纯化层析路线,依次使用疏水柱、阳离子柱、G-25分子筛进行样品的纯化得到终产品。 结果：通过发酵工艺的优化,单罐菌体的产量由600g提高到1000g,菌体表达量由15％提高到30％。单次菌体破碎处理量由每次100g提高到1000g,有利于单批产量的放大。复性液的蛋白浓度由0.2mg/mL提高到1.0m/mL。产品质量有大幅提高,反相纯度提高到98％,达到了欧盟药典RP-HPLC≥97％要求,比活性由0.6×108IU/mg提高到1×108IU/mg。单批产量提高一倍,生产周期缩短50％以上,成本降低了55％。 结论：所建立的G-CSF的制造新工艺适用于工业化生产需要。