双微体(DMs)是细胞内成对存在,可自主复制的染色体外成分,通常含有与细胞应激状态相关的扩增基因,为细胞的耐药性产生,增殖和抗凋亡作用提供选择性优势。在大部分实体瘤和白血病中都检测到双微体的存在,是肿瘤恶性转化的标志之一。其携带的抵抗化疗药物相关基因,使肿瘤细胞产生耐药导致治疗失败。目前,对双微体的认识仅局限在其空间结构,大小和其所携带基因。而对其产生的机制,复制分离的方式还不是十分清楚。本实验从蛋白质组学角度出发,通过对含有双微体的MTX耐药细胞进行比较蛋白质组分析,力求寻找与DMs产生和氨甲喋呤(MTX)耐药相关的蛋白质。 本实验应用蛋白质组学相关技术对NIH3T3和3T3MTX400两种细胞的总蛋白表达水平进行检测,共筛选了4个在不同细胞间表达存在显著差异的蛋白质点。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定,分别为二氢叶酸还原酶(DHFR),过氧化物酶Peroxiredoxinl(Prx1),翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)和泛素相关蛋白(β-Trcp)。并利用RT-PCR和Westernblot对其表达情况进行了验证。 结果表明：过氧化物酶Prxl在MTX抗性细胞中表达水平显著提高。提示在含有DMs的小鼠MTX耐药细胞系中,除了DHFR在拮抗MTX中起主要作用外,其他蛋白如Prxl也对细胞的耐药性,损伤修复、抗凋亡和增殖起重要作用。