芥子碱硫氰酸盐对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭以及药物敏感性的影响和机制研究

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目的:验证芥子碱硫氰酸盐对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其增强肝癌细胞对化疗药物吉西他滨敏感性的作用,并探讨其分子机制。方法:首先验证芥子碱硫氰酸盐对人肝癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及其增强肝癌细胞对吉西他滨敏感性的作用:采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测不同浓度(0、25、50和100μm/L)芥子碱硫氰酸盐对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响;划痕实验检测不同浓度(0、25、50和100μm/L)的芥子碱硫氰酸盐对SMMC-7721细胞迁移能力的影响;Transwell实验检测不同浓度(0、25、50和100μm/L)的芥子碱硫氰酸盐对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响;CCK-8检测芥子碱硫氰酸盐联合吉西他滨对人肝癌细胞株Hep G2增殖的影响;克隆形成实验检测芥子碱硫氰酸盐联合吉西他滨对Hep G2细胞克隆形成的影响;流式细胞术检测芥子碱硫氰酸盐联合吉西他滨对Hep G2细胞凋亡的影响;罗丹明123实验检测芥子碱硫氰酸盐对Hep G2细胞外排药物能力的影响。然后探讨芥子碱硫氰酸盐的作用机制:采用计算机分子对接技术分析芥子碱硫氰酸盐与前列腺素过氧化物酶-1(prostaglandin-en doperoxide synthase 1,PTGS1)、前列腺素过氧化物酶-2(prostaglandin-en doperoxide synthase 2,PTGS2)、基因多药耐药性蛋白(ATP-binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)、(ATP binding cassette subfamily G member 2,ABCG2)的结合能力;Western blotting检测芥子碱硫氰酸盐对SMMC-7721细胞中PTGS1、PTGS2、Bcl2、Bax、MMP2和MMP9蛋白水平的影响以及芥子硫氰酸盐联合吉西他滨对Hep G2细胞中ABCB1、ABCG2、Cleaved caspase-8、Bcl2和Bax蛋白水平的影响。结果:芥子碱硫氰酸盐可抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭的能力(p<0.05);可稳定结合PTGS1、PTGS2,减少肝癌细胞SMMC-7721中PTGS1、PTGS2、Bcl2、MMP2和MMP9的蛋白水平(p<0.05),增加Bax的蛋白水平(p<0.05)。芥子碱硫氰酸盐能增强吉西他滨对Hep G2细胞增殖和克隆形成的抑制作用(p<0.05),增强吉西他滨诱导Hep G2凋亡的能力(p<0.05);降低Hep G2细胞外排药物的能力;芥子碱硫氰酸盐能稳定结合ABCB1和ABCG2,通过抑制ABCB1和ABCG2蛋白水平增强吉西他滨诱导的Bcl2蛋白减少以及Cleaved caspase8和Bax蛋白增加(p<0.05)。结论:芥子碱硫氰酸盐靶向PTGS1和PTGS2,从而抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭。芥子碱硫氰酸盐能靶向抑制多耐药相关蛋白ABCB1和ABCG2,增强肝癌Hep G2细胞对吉西他滨的敏感性。
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