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余甘子果实作为一种药食同源的天然传统中药材,具有丰富的营养价值和药理活性。活性研究显示,余甘子果实不同提取物能降低糖尿病鼠的血糖水平,但其物质基础和作用机制均不明确。本研究聚焦于促进葡萄糖利用、改善糖代谢紊乱的活性,从上述提取物中筛选出促进葡萄糖利用活性较强的提取物,分析其物质基础,并基于C2C12肌细胞模型系统研究其促进葡萄糖摄取和改善棕榈酸诱导的胰岛素抵抗的作用及机理,旨在挖掘余甘子的活性,为余甘子资源的充分利用提供理论依据。骨骼肌是机体利用葡萄糖最主要的组织,也是机体维持糖代谢稳态的重要胰岛素靶组织,因此本研究首先基于C2C12肌细胞模型筛选出促进葡萄糖利用活性较强的余甘子果实水提物（Water Extract of Phyllanthus Emblica L.fruit,WEPE）,采用LC-MS/MS技术分析其组成成分及含量,明确WEPE的物质基础。紧接着,为进一步探究WEPE促进葡萄糖利用活性的作用及机制,采用葡萄糖氧化酶法、2-NBDG法评价其对肌细胞葡萄糖消耗和摄取的作用,通过Western Blotting、蛋白靶点抑制剂、RNA干扰技术对其作用机制进行探究。实验结果显示,基础状态下,WEPE能够增加C2C12肌细胞对葡萄糖的消耗和摄取、促进GLUT4膜转位及AMPK-AS160/p38 MAPK通路蛋白磷酸化,但这些促进作用被AMPK抑制剂Compound C所逆转,同时,用siRNA技术干扰AMPK基因的表达后,WEPE对细胞葡萄糖摄取的增加作用被逆转。使用CaMKKβ抑制剂STO-609对细胞预处理后再加入WEPE处理,结果显示WEPE对AMPK通路蛋白磷酸化、葡萄糖摄取和GLUT4膜转位的促进作用被削弱。综合以上结果,基础状态下,WEPE通过CaMKKβ激活AMPK信号通路,促进GLUT4转位,从而提高C2C12肌细胞对葡萄糖的摄取水平。棕榈酸可抑制C2C12肌细胞胰岛素信号通路的转导并削弱胰岛素介导的葡萄糖摄取,诱发胰岛素抵抗。WEPE可显著改善棕榈酸诱发的细胞胰岛素抵抗,主要表现为提高胰岛素介导的葡萄糖摄取及AKT磷酸化。通过检测AMPK信号通路和内质网应激中关键蛋白的表达水平,并采用相关蛋白靶点抑制剂进一步探究WEPE的作用机制。结果显示,WEPE一方面激活AMPK信号通路,促进ACC的磷酸化,从而增强脂肪的β氧化,同时增强AS160的磷酸化水平,促进GLUT4膜转位,增加细胞对葡萄糖的摄取;一方面抑制PKCθ的表达,削弱PKCθ对AKT磷酸化的抑制作用,提高细胞的胰岛素敏感性;第三,WEPE下调细胞中Bip、CHOP、eIF2α、IRE1α的表达水平,缓解内质网应激,从而改善棕榈酸对细胞葡萄糖摄取的削弱作用。综上所述,WEPE通过CaMKKβ-AMPK-AS160/p38 MAPK途径促进C2C12肌细胞葡萄糖摄取,且在棕榈酸所诱导的胰岛素抵抗肌细胞中,WEPE通过激活AMPK-AS160通路和缓解内质网应激,从而改善胰岛素抵抗。