【摘 要】
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以褐黄血蜱唾液腺蛋白质组分析结果为线索,唾液腺转录组序列为依据,设计引物,扩增褐黄血蜱卵黄蛋白原家族基因全长,观察四种基因在褐黄血蜱的表达水平及在卵中的分布情况,以
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以褐黄血蜱唾液腺蛋白质组分析结果为线索,唾液腺转录组序列为依据,设计引物,扩增褐黄血蜱卵黄蛋白原家族基因全长,观察四种基因在褐黄血蜱的表达水平及在卵中的分布情况,以便为探索通过消减营养物质,干扰胚胎发育,实现控蜱目标的新策略奠定基础。RACE法扩增Vg-1、Vg-2、Vg-3和Vg-B的3’和5’端序列,获得编码Vg-1、Vg-2、Vg-3和Vg-B四基因的全长cDNA序列。Vg-1基因全长5453bp,ORF长5079bp,编码1693个氨基酸;Vg-2基因全长4953bp,ORF长4671bp,编码1557个氨基酸;Vg-3基因全长4811bp,ORF长4602bp,编码1534个氨基酸;Vg-B基因全长9754bp,ORF长9576bp,编码3192个氨基酸。qPCR分析结果表明:Vg-1、Vg-2、Vg-3和Vg-B四基因在幼、若、雌成蜱不同发育阶段表达水平为幼蜱<若蜱<雌成蜱;在不同的饱血状态下的表达水平均为1/4饱血雌成蜱<1/2饱血雌成蜱<3/4饱血雌成蜱<饱血雌成蜱;在唾液腺中的表达水平均随血餐增加而上调;在卵巢中的表达水平均随着血餐增加而下调;在褐黄血蜱同一组织中,Vg-2>Vg-B>Vg-1>Vg-3。LC-MS/MS法分析新鲜的褐黄血蜱卵,共检出特异性肽段221条,鉴定蛋白53种,其中高可信蛋白12种;能够确定的功能蛋白有肌动蛋白和Vg-2Ah,且Vg-2Ah是卵中存在的唯一种卵黄蛋白原,未发现卵中存在Vg-1、Vg-2、Vg-3和Vg-B。比对显示:Vg-2Ah与Vg-2相似性为12.59%,是Vg家族的不同成员。
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