人参多糖的分离、纯化及结构研究

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人参根粗多糖经淀粉酶除淀粉,Sevage法脱蛋白,80%无水乙醇醇沉后得到人参根多糖GR,溶于1M NaCl溶液离心分离得到GRP和GRS两种多糖级分,苯酚-硫酸法检测其总糖含量分别为99.84%,81.70%。间羟联苯法检测GRP的糖醛酸含量为97.31%,HPLC法检测GRP的单糖组成为GalUA,痕量Gal,Ara和Glc。红外光谱检测GRP中的糖醛酸为α构型,考马斯亮蓝法检测GRP不含蛋白质。高碘酸氧化、Smith降解,13C NMR分析表明GRP主要由α-(1→4)-D-GalUA构成,在2,3位上有由α-(1→4)-D-GalUA构成的支链。GRS经离子交换色谱柱DEAE-Sepharose-CL-6B和分子筛排阻层析柱Sepharose-CL-6B,Sephadex-G-75进一步分级纯化得到四个多糖级分GRS1-Ⅰ,GRS2,GRS3-Ⅱ,GRS4,苯酚-硫酸法检测其总糖含量分别为98%,87.5%,98%, 60%。间羟联苯法检测GRS1-Ⅰ不含糖醛酸,GRS2,GRS3-Ⅱ,GRS4的糖醛酸含量分别为4.4%,3.8%,58%。HPLC法检测GRS1-Ⅰ,GRS2,GRS3-Ⅱ,GRS4单糖组成分别为Glc:Gal:Ara:Man=3.84:1:0.29,Man:Glc:Ara:Gal:Rha:Xyl:GlcUA=0.23:0.54:0.40:1: 0.029:0.026:0.028,Rha:GlcUA:GalUA:Gal:Ara=0.096:0.023:0.033:1:0.73,Rha:GalUA: Gal:Ara=0.58:3.49:1:1.23。红外光谱法检测四种多糖级分均有多糖羟基吸收峰,紫外光谱扫描GRS1-Ⅰ,GRS2,GRS3-Ⅱ在260nm和280nm处均无吸收,而GRS4在280nm处有少量吸收。HPLC法检测GRS1-Ⅰ和GRS3-Ⅱ的分子量分别为4611,6065。分子筛层析Sepharose-CL-6B分析GRS2和GRS4的分子量分布不均一。高碘酸氧化、Smith降解,甲基化,13C NMR分析表明:GRS1-Ⅰ由α-(1→4)-D-Glcp和少量β-(1→6)-D-Galp构成,GRS3-Ⅱ主要由β-(1→4)-D-Galp,β-(1→3)-D-Galp和α-(1→5)-D-Araf构成。高碘酸氧化、Smith降解,甲基化分析表明:GRS2的主链连接方式分别为1→4、1→4,6键型和1→2、1→6、1→2,6键型,另外有Man,Gal,Glc以不被高碘酸氧化的键型连接,而且有大量Ara,Man,Gal,Glc位于支链;GRS4中GalUA的糖苷键构型非常复杂,大部分GalUA是以不被高碘酸氧化的键型连接,一部分GalUA以1→2、1→2,6键型连接,极少量的GalUA是以1→4、1→4,6键型连接。
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