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目的:分离纯化出裙带菜多糖活性成分,观察裙带菜多糖对人外周血单个核细胞(PBMC)增殖、淋巴细胞亚群、细胞因子分泌的影响,探讨裙带菜多糖的免疫调节机理。
方法:
1.采用逐步分离法对裙带菜多糖进行分离与纯化。采用水提醇沉法进行初步分离,柱层析法进一步纯化,应用硫酸--苯酚法进行成分鉴定。
2.采用MTT法分析裙带菜多糖提取物对人外周血淋巴细胞体外增殖作用的影响。
3.用流式细胞术检测淋巴细胞亚群的变化。
4.应用酶联免疫方法测定裙带菜多糖作用后淋巴细胞培养上清中细胞因子的浓度。
结果:
1.裙带菜粗提液经Sephadex G-100凝胶过滤层析柱进一步纯化后,经硫酸一苯酚法鉴定,得到单一的对称峰,最终得到多糖化合物。
2.裙带菜多糖对PBMC增殖的影响与阴性对照组相比,裙带菜多糖对PBMC的增殖反应有明显的促进作用,随着浓度的增加,增殖反应明显增强,其中,20μg/ml浓度组OD值最高(0.216±0.007),随着多糖浓度的继续增加,OD值逐渐下降,但仍明显高于阴性对照组。
3.裙带菜多糖对淋巴细胞亚群的影响与阴性对照组相比,不同浓度的裙带菜多糖可刺激CD4+T细胞的增殖,但经统计学检验无显著性差异;随着裙带菜多糖浓度的增加,CD8T细胞的比例有明显增加,较阴性对照组相比有显著性差异;但各浓度组裙带菜多糖对B细胞增殖反应无明显影响,与阴性对照组相比无显著差异;除0.5μg/ml组外,随着裙带菜多糖浓度的增加,NK细胞比例渐增高,与阴性对照组相比,差异有显著性,在20μg/m1时,达到最高,为9.67±1.53。
4.裙带菜多糖对PBMC分泌细胞因子的影响不同浓度的裙带菜多糖对PBMC产生IL-6的作用无明显影响;但裙带菜多糖可明显刺激PBMC产生IL-2,20μg/ml时达最高,为阴性对照组的2.19倍;各浓度组裙带菜多糖对PBMNC产生IL-10作用无明显影响。
结论:
1.裙带菜多糖可明显刺激人外周血淋巴细胞的增殖。
2.裙带菜可使人外周血淋巴细胞产生IL-2增加,而对IL-6,和IL-10的产生无明显影响。
3.裙带菜多糖可影响人外周血淋巴细胞中CD4+T/CD8+T的比例,使CD8+T比例增高。
4.裙带菜多糖可促进人外周血淋巴细胞中的NK细胞增殖。