藏红花花瓣抗氧化活性部位的筛选及对高脂血症的预防作用

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藏红花(Saffron, Crocus sativus L.)为名贵的中药材,药理学研究表明,藏红花对于癌症、冠心病、动脉粥样硬化、高血脂症等多种疾病具有较好的防治作用。其传统药用部位为干燥的柱头,而75000朵花仅能得到0.45 Kg花柱;大量的非药用部位—花瓣在藏红花的制药工业中成为副产物,造成极大的资源浪费。本课题组研究发现,藏红花花瓣中含有多种活性成分,具有相当大的利用价值。为实现资源深度开发和综合利用,本文对藏红花花瓣的生物活性进行了系统评价。本研究以废弃的藏红花花瓣为实验材料,利用4种体外抗氧化活性体系筛选出其活性部位;从化学成分分析及体外实验研究其活性特征;利用动物模型研究藏红花花瓣活性部位对高脂血症的预防作用。本论文研究成果为藏红花的深度利用提供理论依据。论文主要包括以下三个部分:一、藏红花花瓣抗氧化活性部位的筛选及研究藏红花花瓣乙醇提取物(Ethanol extract from the petals of C. sativus, EPC),采用有机溶剂萃取法分离EPC,分别得到石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相5个不同极性部位。抗氧化结果显示,藏红花花瓣乙醇提取物以及5个不同极性部位均能明显清除自由基,其中以乙醇提取物及乙酸乙酯相的清除能力较强。考虑到实际生产中的经济、效率及环保等问题,本论文以藏红花花瓣的乙醇提取物作为研究对象,对其展开进一步研究。在抗脂质过氧化研究中,5 mg/mL EPC对红细胞自氧化及H202诱导的过氧化溶血的抑制率分别达到38.36%和75.45%;1 mg/mL EPC对小鼠肝脏自氧化及H2O2诱导的过氧化所产生的MDA的抑制率分别为89.78%和59.18%,说明:藏红花花瓣的乙醇提取物具有良好的抗氧化活性。二、藏红花花瓣醇提物的纯化、成分分析及体外活性评价采用HPD826型号大孔树脂纯化EPC,得到纯化后的藏红花花瓣乙醇提取物(Purificated of ethanol extract from the petals of C.sativus, PEPC)。PEPC的最优纯化条件为:树脂最佳吸附时间为2小时,最佳解吸附时间为2小时;径高比为1:10:最大上样体积为一倍柱体积,最佳上样浓度50 mg/mL;最佳乙醇洗脱浓度60%;最佳洗脱剂体积为5倍柱体积。采用上述提取、纯化条件,每100 g藏红花花瓣可以得至(?)(9.71±1.18)gPEPC。PEPC中黄酮醇类的含量为(19.2+0.08)%;多酚的含量为(18.22±0.07)%;皂苷类物质的含量为(16.7±0.52)%;总糖的含量为(9.2±0.45)%;含N量为(1.71±0.09)%。实验以对DPPH的清除能力为评价指标比较了PEPC与EPC的抗氧化效果,结果显示:PEPC的抗氧化效果明显优于EPC,说明纯化对藏红花花瓣乙醇提取物的活性物质起到了富集作用。本实验进一步探讨了PEPC对黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase, XOD)的活性影响及细胞毒活性,研究结果显示藏红花花瓣能够有效抑制XOD的活性,半数抑制浓度(IC50)为1.75 mg/mL。在本研究采用PC3、SW620及MDA-MB-231评价了PEPC对其增殖的影响,结果显示PEPC在一定程度上能够抑制这三种细胞的增殖及生长,IC50分别为:1.19mg/mL,1.53 mg/mL,0.90 mg/mL,表明可能其具有细胞毒作用。三、PEPC急性毒性评价及其对高脂血症的预防作用动物急性毒理实验:观察期间,4.9、7和14 g/kg BW三个剂量组分别于灌胃后6小时各死亡1只,经解剖发现死亡由人为性灌胃损伤所致。除此之外,各组小鼠在观察期间体态特征表现正常,生存良好。按照霍恩氏法计算得到PEPC的半致死剂量LD50=14.91 g/kg BW,按照急性毒性分级法,PEPC为实际无毒。建立高脂血症动物模型检测PEPC对高脂血症的预防作用。本PEPC的三个剂量均可有效控制由高脂饮食引发的小鼠体重增长过快;与高脂对照组相比,500和200 mg/Kg BW能够极显著的降低小鼠的体重(p<0.01),PEPC的三个剂量组均能够极显著的降低脂肪垫系数(p<0.01)、血清TC浓度(p<0.01)及LDL-C水平(p<0.01)。实验结束时,各给药预防组降脂率分别为:辛伐他汀组29.48%,PEPC 500 mg/Kg BW为30.80%,PEPC 200 mg/Kg BW为33.39%,PEPC 100 mg/Kg BW为23.89%。结果表明,PEPC具有明显的降血脂活性。
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