Ⅰ.共抑制与RNA介导的病毒抗性的研究;Ⅱ.水稻矮缩病毒Pns9蛋白功能的研究

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在转基因植物中,当外源转化基因与植物内源基因相同或同源性很高时,外源转化基因和与它同源的内源基因均不会得到表达,这种现象被称为共抑制(co-suppression)现象.将查尔酮合酶基因(chalconesynthase,chsA)转化矮牵牛会发生共抑制.转基因植物由RNA介导的对病毒的抗性(RNA-mediatedvirusresistance)与共抑制在许多方面有相似性.烟草花叶病毒(TMV)54-kDa蛋白基因(54K)可能能够以RNA的方式介导对TMV的抗病性.我们构建了54K基因的七个突变体,一个为进行了移码突变的全长54K基因,三个为分别覆盖N-端约2/3、C-端约2/3和基因内部261bp的缺失突变体.水稻矮缩病毒(ricedwarfvirus,RDV)是水稻普通矮缩病的病原,属呼肠孤病毒科,植物呼肠孤病毒属.其基因组由12条双链RNA片段S1-S12构成,其中S9编码一个非结构蛋白Pns9.将S9与绿色荧光蛋白GFP报告基因串联,在烟草叶片表皮细胞中进行瞬时表达,激光共聚焦显微镜观察到S9在烟草叶片表皮细胞的细胞质中有荧光存在.采集感染RDV的水稻叶片,做超薄切片,利用Pns9抗体作免疫胶体金试验,发现Pns9非结构蛋白定位于充满病毒核心粒子的病毒胞质中.
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