【摘 要】
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多糖类化合物在生命活动中扮演重要的角色,具有生物信息传递,抗肿瘤、抗炎、免疫调节等诸多方面生物功能,受到科研工作者的极大重视。但是由于多糖化合物生物合成机制复杂,分
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多糖类化合物在生命活动中扮演重要的角色,具有生物信息传递,抗肿瘤、抗炎、免疫调节等诸多方面生物功能,受到科研工作者的极大重视。但是由于多糖化合物生物合成机制复杂,分子量巨大分子,结构多羟基多支链,以及相应的研究方法局限等原因,导致多糖的研究相对于蛋白质研究进展缓慢。多糖生物标记是研究多糖分子机制的重要手段之一,那么研究建立便捷实用的标记方法变得尤为重要。量子点凭借着自身稳定的光学性质和尺寸可调性等优点,为多糖标记探针的构建提供了新的思路。本文致力于构建简单、快速、可视化的多糖荧光探针。我们主要采用了两种方法进行多糖荧光探针的构建。第一种方法,我们使用了认可度比较高的链霉亲和素与生物素专一性结合的方法来构建多糖荧光探针,实验利用链霉亲和素与量子点共价偶联,生物素与多糖共价偶联,并将制得的2种复合物进行自组装得到多糖荧光探针。实验还利用本实验室前期制备的灵芝多糖SBT加以验证,实验结果显示,多糖荧光探针可以专一的结合到巨噬细胞THP-1细胞表面的多糖受体上,多糖荧光探针的光学性质稳定,不易猝灭。第二种方法,我们采用了直接合成法,减少了多步反应造成的样品浪费和合成时间长的缺点。实验中使用牛血清白蛋白(BSA)作为桥链,避免了量子点对葡聚糖(Dextran)空间结构的影响。首先,将BSA与葡聚糖共价偶联,其次,使用BSA-Dextran复合物共价偶联量子点,形成荧光探针。实验结果显示,探针与巨噬细胞THP-1细胞表面的多糖受体结合良好,实验方法简单,探针具有良好的荧光强度。两种方法各具优势,前一种专一性结合,后一种方法简单,这都为后续构建多糖芯片、筛选多糖受体、定量多糖受体打下基础。
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