菊黄东方鲀肌肉多肽的提取及生物活性的研究

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多肽由蛋白质分解所得,生物功能极为丰富。我国海洋生物资源十分丰富,以多肽作为切入点对海洋生物资源进行研究有着很好的应用前景。河鲀肌肉富含蛋白质,本文以菊黄东方鲀(Takifugu flavidus)肌肉作为原材料,以酶解液的水解度为指标,进行蛋白酶的筛选实验及单因素实验和响应面试验,得出最优酶解工艺:风味蛋白酶,55℃、pH 7、加酶量4521.96 U/g、料液比1:10(g/mL),酶解4.5 h。将酶解液经陶瓷膜、超滤膜逐级处理,收集0-1 KD组分,冻干所得样品为菊黄东方鲀肌肉风味蛋白酶酶解多肽(TFMP-F)。TFMP-F有抗氧化能力,清除DPPH自由基和·OH自由基的IC50为1200 μg/mL、260 μg/mL,对Fe3+有一定的还原力。TFMP-F能显著提高小鼠负重游泳时间和疲劳小鼠肝糖原含量,降低疲劳小鼠血清中尿素氮和乳酸含量。说明TFMP-F能够增强小鼠运动能力,缓解运动性疲劳。小鼠急性毒理试验证实TFMP-F无毒。以菊黄东方鲀肌肉作为原料进行酶解实验,以体外蘑菇酪氨酸酶(mTYR)活性抑制率为指标,进行蛋白酶的筛选实验及单因素实验和响应面试验,得出最优酶解工艺:胰蛋白酶,36.9℃、pH 7.0、加酶量3011 U/g、料液比1:10(g/mL),酶解8 h。酶解液经陶瓷膜、超滤膜逐级处理,收集0-1 KD组分,冻干所得样品即菊黄东方鲀肌肉胰蛋白酶酶解多肽(TFMP-T)。TFMP-T对mTYR活性的抑制机理是不可逆抑制。0-2000 μg/mL TFMP-T不影响小鼠B16F10黑色素瘤细胞增殖,但能够抑制B16F10细胞中黑色素合成和酪氨酸酶(TYR)活力,且呈现浓度依赖性。通过Western blot的方法进一步探究TFMP-T抑制黑色素合成的作用机制。结果表明,TFMP-T可通过调控MC1R通路,使MITF的表达量下降,进而作用于TYR家族蛋白,使其表达量下降,抑制黑色素的合成。紧接着,我们以斑马鱼模型发现0-200 μg/mL TFMP-T对斑马鱼胚胎没有毒性,但可以抑制斑马鱼胚胎中黑色素含量和TYR活力以及TYR家族蛋白的表达,最终抑制斑马鱼胚胎黑色素的合成。小鼠急性毒理试验证实TFMP-T无毒。本研究获得2种菊黄东方鲀肌肉多肽,TFMP-F具有抗氧化和抗疲劳功效,有望开发成抗疲劳保健品;TFMP-T可抑制黑色素的形成,为美白化妆品的开发提供理论依据。
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