【摘 要】
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目的:本研究通过检测套细胞淋巴瘤（Mantle Cell Lymphoma,MCL）中KDM5B、miR-194的表达及临床意义,在体外研究KDM5B和miR-194表达在MCL中的功能,初步探讨二者在MCL发生的可能机制。方法:1.病例分组:实验组为经病理组织学及免疫组织化学证实的临床资料完整的套细胞淋巴瘤（MCL）45例;对照组为反应性增生性淋巴结炎30例;2.MCL细胞系:体外实验选用五株M
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目的:本研究通过检测套细胞淋巴瘤（Mantle Cell Lymphoma,MCL）中KDM5B、miR-194的表达及临床意义,在体外研究KDM5B和miR-194表达在MCL中的功能,初步探讨二者在MCL发生的可能机制。方法:1.病例分组:实验组为经病理组织学及免疫组织化学证实的临床资料完整的套细胞淋巴瘤（MCL）45例;对照组为反应性增生性淋巴结炎30例;2.MCL细胞系:体外实验选用五株Mino、Z-138、Je Ko-1、RF-1、REC-1细胞株;选取Mino细胞和Je Ko-1细胞,构建下述转基因细胞:（1）构建沉默腺病毒KDM5B sh RNA细胞和过表达腺病毒KDM5B-GFP细胞;（2）构建沉默腺病毒miR-194 inhibitor细胞和过表达腺病毒miR-194 mimic细胞;（3）构建共感染腺病毒miR-194 mimic+KDM5B-GFP细胞;（4）选用5例健康志愿者的外周血单个核细胞作为对照组。3.免疫组织化学方法检测病人组织KDM5B蛋白表达;4.MTT法观察腺病毒感染后对细胞增殖的影响;5.流式细胞术检测腺病毒感染后细胞凋亡率的变化;6.荧光定量PCR检测病人组织及腺病毒感染后细胞的KDM5B m RNA及miR-194表达;7.Western Blot检测腺病毒感染后细胞KDM5B蛋白的表达;8.双荧光素酶报告实验检测KDM5B是否是miR-194靶基因;9.通过KDM5B恢复表达实验,检测细胞的增殖情况;10.统计分析:用SPSS19.0软件分析,常规进行方差齐性检验,正态性检验。计量资料实验数据以均数±标准差（mean±SD）表示。单变量两组资料之间的比较采用t检验,多组资料之间的比较采用单因素方差分析;方差不齐采用非参数;两组间相关性分析采用Spearman分析方法。P<0.05为差异具有统计学意义。结果：1.KDM5B蛋白高表达率在对照组为16.67%,低于MCL组织的48.89%,而对照组中miR-194表达为0.991±0.245,高于MCL的0.223±0.149,差别有统计学意义（P<0.05）;Spearman等级相关分析显示KDM5B蛋白及miR-194在MCL存在负相关（P0.05）;而血清β2-MG水平越高,IPI评分越高、Ann-Arbor临床分期越晚,KDM5B表达水平越高、miR-194表达水平越低,有统计学差异（P<0.05）。2.干扰腺病毒KDM5B sh RNA能够下调Mino和Je Ko-1细胞KDM5B基因m RNA及蛋白的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞的凋亡,与对照组相比,差别有统计学意义（P<0.05）。腺病毒KDM5B-GFP能够上调Mino和Je Ko-1细胞KDM5B基因m RNA及蛋白表达,能促进Mino细胞增殖,抑制Mino细胞凋亡（P0.05）。3.miR-194 mimic感染Mino和Je Ko-1细胞,可下调Mino和Je Ko-1细胞KDM5B基因的蛋白表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡（P<0.05）。向Mino和Je Ko-1细胞感染miR-194 inhibitor,可上调Mino和Je Ko-1细胞KDM5B基因的m RNA及蛋白表达,能促进Mino细胞增殖,抑制Mino细胞凋亡（P0.05）。4.双荧光素酶报告实验验证在MCL中KDM5B是miR-194靶基因之一,过表达KDM5B部分抵消miR-194 mimic抑制Mino和Je Ko-1细胞增殖的作用。结论:1.MCL患者中KDM5B高表达,而miR-194低表达,二者呈负相关。KDM5B、miR-194表达与MCL患者的血清β2-MG,IPI评分、Ann-Arbor分期密切相关。2.下调KDM5B的表达可抑制细胞增殖及促进凋亡,而上调其表达可促进细胞增殖及抑制凋亡,KDM5B可能是MCL一个癌基因。3.上调miR-194的表达可抑制细胞增殖及促进凋亡,而下调其表达促进细胞增殖及抑制凋亡,miR-194可能是一个MCL抑癌基因。4.KDM5B是miR-194的靶基因之一,miR-194可以通过下调KDM5B的表达,抑制MCL细胞增殖。
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