被孢霉属（Mortierella）是目前国内外研究亚油酸（Linoleic Acid, LA）和γ-亚麻酸（γ-Linolenic, GLA）等多不饱和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acids, PUFAs）合成的主要真菌,其中深黄被孢霉（Mortierella isabellina）是国内最具有潜力工业化生产PUFAs的丝状真菌。它只合成n-6途径的PUFAs,如LA和GLA,且合成途径相对简单,相关基因也已获得克隆和功能表达,这为研究不同饱和度脂肪酸对菌株低温适应性的影响提供了一个良好的模型。△12-脂肪酸脱氢酶（Delta-12-fatty acid desaturase, D12D）即油酸脱氢酶（Oleate desaturase）是低等真核生物中PUFAs合成的限速酶。油酸（Oleic acid, OA）在其作用下转化成LA,而LA是n-6和n-3系列PUFAs的共同前体。本研究以M. isabellina6-22为研究对象,从0～35℃范围内研究温度对菌体生长、PUFAs合成细胞膜脂流动性的影响,分析菌体的低温适应性。结果表明,M6-22可进行低温生长,低温条件下菌体生长速度虽然降低,却利于PUFAs的累积,并且低温促进菌体细胞膜流动性的增加。本研究选择红色荧光蛋白基因DsRED作为遗传转化的筛选标记,构建中间表达载体pS-DsRED。在此基础上,以M6-22的D12D （GenBank accession number:AF417245）为模板扩增1-500bp的片段,分别正反向插入载体pS-DsRED中角质酶内含子（Cutinase intron）两侧的多克隆位点,构建了基于DsRED筛选标记的D12D基因RNAi表达载体pSREDMID12RNAi,酶切和测序分析验证了其正确性。本研究建立了M. isabellina原生质体再生体系,再生率为15.7%,虽然再生率略低,但可用于原生质体转化。通过PEG/CaCl2介导将所构建的质粒导入M6-22中,形态观察和荧光显微结果均显示DsRED已获得表达,并且PCR鉴定DsRED表达框已整合到受体菌的基因组中。GC分析结果显示,DsRED表达框的整合不影响PUFAs合成途径,RNAi质粒使D12D转录水平下调从而引起LA和GLA含量减少,但不显著。本研究通过探讨低温条件下M6-22中PUFAs合成的调节机制,有助于揭示低等丝状真菌PUFAs合成与低温适应性的调节关系。在此基础上,可通过遗传学手段提高丝状真菌产PUFAs的能力,探索工业化应用前景,促进云南省微生物资源的开发和利用,同时对我国真菌分子生物学和真菌学科的发展也具有重要的意义。