【摘 要】
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沙丁胺醇是一种肾上腺素能受体激动剂,因非法使用产生的环境残留,严重影响人类的身体健康,因此针对其建立一种超灵敏检测方法尤为重要。目前的一些检测技术以大型仪器为主,很难满足现场需要。本文建立了一种基于免疫磁珠、桥接DNA与两种不同的DNA扩增技术相结合的高灵敏、特异性检测沙丁胺醇(SAL)的方法。首先,分别在3端和5端修饰了完全抗原形成邻位连接探针,通过偶联磁珠的抗体特异性识别两个邻位连接探针,在桥
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沙丁胺醇是一种肾上腺素能受体激动剂,因非法使用产生的环境残留,严重影响人类的身体健康,因此针对其建立一种超灵敏检测方法尤为重要。目前的一些检测技术以大型仪器为主,很难满足现场需要。本文建立了一种基于免疫磁珠、桥接DNA与两种不同的DNA扩增技术相结合的高灵敏、特异性检测沙丁胺醇（SAL）的方法。首先,分别在3端和5端修饰了完全抗原形成邻位连接探针,通过偶联磁珠的抗体特异性识别两个邻位连接探针,在桥接DNA（bridge）的桥接作用下将两个邻位探针连接形成全长扩增子,以此为模板通过两种DNA扩增技术实现信号放大。两种DNA信号放大技术分别是实时荧光定量PCR（qPCR）技术和链置换扩增（SDA）技术。结果表明,该方法的设计具有较高的灵敏度,其中,在使用实时荧光定量PCR方法检测SAL的线性范围为1.0×10-21.0×103 ng·mL-1,检出限为1.20×10-22 ng·mL-1,测定在自来水中SAL的加标回收率在87.1%108.8%之间;在使用链置换扩增技术检测SAL的线性范围为1.0×10-31.0×102 pg·mL-1,检出限为2.90 fg·mL-1,测定在自来水样品中SAL的加标回收率在93.1%103.3%之间。两种方法在其结构功能类似物中具有良好的特异性。本研究通过设计免疫磁珠、桥接DNA在不同的扩增技术下实现对沙丁胺醇的高灵敏检测,搭建了一个高特异性、通用的检测平台。
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