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牛瑟氏泰勒虫(T．sergenti)p33蛋白是T．sergenti主要虫体表面蛋白之一，具有很好的反应原性和免疫原性。本试验应用的抗原是在E．coli DH5 α表达系统高效表达的韩国株T．sergenti(韩国株与中国株的T．sergenti氨基酸序列的同源性为99.6％)p33融合蛋白。经Western blot分析，韩国株T．sergenti的p33蛋白和p33融合蛋白与中国牛血清中T．sergenti p33抗体具有良好的特异性反应，而空表达载体MBP蛋白则不能。因此，韩国株T．sergenti p33融合蛋白可以用于检测中国株T．sergenti p33抗体间接ELISA方法的诊断抗原。 对间接ELISA的反应条件进行了摸索，确定了最适工作条件。结果表明，Nunc公司生产的酶标板的变异系数为4.2％，达到间接ELISA的要求；p33融合蛋白抗原最适包被浓度为1.5μg／ml，最适包被条件为4℃ 12h；待检血清的最适稀释度为1：100，酶标二抗的最适工作浓度为1：4000，血清与酶标二抗的反应时间均为4℃ 1h；选用3％脱脂乳作为酶标板的最适封闭液，最适封闭时间为37℃ 1h；PBST稀释液中脱脂乳蛋白稳定剂的浓度为3％；底物最适反应条件为室温25min；阴阳性临界值为0.35。经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验，表明建立的间接ELISA方法是特异的，且重复性好；与乳胶凝集试验(LAT)进行比较，阴性符合率为90.0％，阳性符合率为100％，总符合率为96.7％，P＞0.05，说明两种检测方法无显著性差异；对采集于延边州牛瑟氏泰勒虫病流行地区的珲春市、敦化市的104份牛血清样品进行间接ELISA检测，结果珲春市56份牛血清样品的T．sergenti阳性率为73.2％；敦化市48份牛血清样品的T．sergenti阳性率为60.4％。 本试验在国内首次应用韩国株T．sergenti p33融合蛋白为抗原，成功建立了一种检测中国牛血清中T．sergenti p33抗体的间接ELISA诊断方法，为我国牛瑟氏泰勒虫病的免疫监测和血清学调查提供了一种快捷、敏感、特异的血清学诊断方法。