研究目的:研究异甘草素对卵巢癌转移的影响及机制研究的初步探讨。研究方法:(1)体外试验:a.采用MTT实验检测异甘草素对卵巢癌细胞株OVCAR5、SKOV3、ES2和TOV21G生长的影响。b.选用异甘草素高中低1,5,10μM三个浓度,采用Transwell小室实验和创伤愈合划痕实验用于研究异甘草素是否可以抑制卵巢癌细胞运动能力。c.采用基质包被的Transwell小室检测异甘草素是否能抑制卵巢癌细胞侵袭能力。d.采用倒置显微镜观察EMT相关标志蛋白表达的影响。f.使用GLISA试剂盒检测异甘草素对Rac1活性的影响。g.采用蛋白免疫印迹法检测异甘草素对Erk1/2和Src蛋白表达的影响。h.采用EMT PCR Array和实时荧光定量PCR筛选及验证异甘草素对EMT相关基因及转录因子的影响。(2)体内实验:a.构建人卵巢癌荧光素酶细胞株SKOV3/Luc。b.采用腹腔注射方法建立裸鼠体内卵巢癌转移模型。c.使用生物发光技术观察异甘草素对裸鼠体内卵巢癌生长和转移情况。d.持续给药直至裸鼠自然死亡,研究异甘草素对裸鼠生存的影响。e.解剖,观察瘤体在腹腔转移情况,收取瘤体进行免疫组化分析。f.解剖,瘤体采用实时荧光定量PCR检测EMT相关蛋白以及EMT转录因子在mRNA水平的变化。研究结果:1.高浓度的异甘草素对卵巢癌细胞生长有抑制作用,0-10μM低浓度的异甘草素对卵巢癌细胞生长没有明显的抑制作用。2.10μM异甘草素作用卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR5 72h后,细胞形态从细长间质形态变成卵石样上皮形态。3.10μM异甘草素能明显抑制卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR5的迁移和侵袭。4.10μM异甘草素作用卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR5 72h后,下调其EMT间质标志蛋白Vimentin和N-cadherin的表达,同时上调上皮标志蛋白E-cadherin的表达,下调EMT转录因子ZEB1的表达。5.10μM异甘草素能降低卵巢癌细胞中Rac1活性。6.10μM异甘草素下调p-Erk1/2和p-Src蛋白的表达,对Erk1/2和Src蛋白表达没有影响。7.卵巢癌腹腔转移模型造模成功,相比较对照组,异甘草素能延长卵巢癌动物的存活,瘤组织免疫组化实验结果以及qRT-PCR结果与体外检测结果一致。结论:异甘草素通过Rac1-MEK1/Src信号通路来逆转卵巢癌EMT过程,同时ZEB1转录因子调控该过程,从而发挥抑制卵巢癌转移的作用。