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新城疫是由新城疫病毒(NDV)引起的急性、高度传染性的烈性动物传染病,对养禽业经济造成严重损害,被世界动物卫生组织(OIE)规定为必须通报传染病,农业部认定的一类传染病。NDV由致病型禽副粘病毒1型(APMV-1)引起,具有广泛的宿主范围,能够感染超过240种鸟类,其中鸡对此病毒尤为敏感。机体防御反应的建立为模式识别受体识别病原相关分子模式,而后由多种转录因子参与调控。双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)为丝/苏氨酸蛋白激酶,可介导激活后的一些级联反应,如介导eIF-2α磷酸化,磷酸化eIF-2α可抑制mRNA转录,进而抑制病毒蛋白合成,如水泡性口炎病毒。PKR也为模式识别受体一种,可通过自我磷酸化调控NF-κB信号通路,该通路可被大量刺激物激活,如细菌、病毒抗原等,从而调控相关基因转录,最终在抗病毒方面发挥重要作用。而锌指蛋白A20在肿瘤坏死因子受体,Toll样受体、T细胞和B细胞受体介导的NF-κB信号通路的活化具有负向调控作用。NF-κB信号通路紊乱与多种疾病有关,因此了解与NF-κB信号通路有关的调控对改善炎症反应,维持机体平衡十分重要。为了阐明NDV感染是否引起PKR介导NF-κB信号通路激活和锌指蛋白A20对NF-κB通路的负调控作用。本研究首先以NDV感染HeLa细胞,利用Western blot、RT-PCR、间接免疫荧光等方法一方面证明了 NDV感染可激活PKR,并由PKR自我磷酸化介导NF-κB信号通路激活和IFN-β、IL-6、IL-8等细胞因子释放,另一方面探究锌指蛋白A20调控NF-κB信号通路的机制。NDV感染由NF-κB信号通路诱导表达并磷酸化激活A20,通过过表达A20可抑制p65入核,而缺失S381磷酸化位点的A20则失去这个功能,说明S381的磷酸化对A20负向调控NF-κB信号通路发挥重要作用。接着通过间接免疫荧光检测A20在NDV感染过程中以点状分布于细胞质中,且定位于蛋白质聚集体与溶酶体中。肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)为NF-κB信号通路的接头蛋白,通过Western blot检测TRAF2在NDV感染16小时后发生降解,而过表达A20后发现TRAF2降解现象更加明显,而失去S381磷酸化位点的A20则不具有此现象。然后通过间接免疫荧光检测在NDV感染过程中TRAF2也以点状分布于细胞质溶酶体中,并与A20发生共定位现象。以上结果说明锌指蛋白A20可与TRAF2相互作用,并将其拖至溶酶体进行降解,这是A20负向调控NF-κB信号通路又一机制。