类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）的主要病理特征是滑膜炎,同时伴随着滑膜细胞过度增殖引起的滑膜增生、软骨及骨破坏等。目前,现有的治疗药物虽可有效控制病情,但价格昂贵且副作用较大。中药治疗RA历史悠久,具有疗效好、价格低且副作用小的优点。然而,由于中药成分复杂,药效成分及作用机制不明确,使其进一步发展受到限制。“九味汤”是一种由九味中草药配伍而成的复方中药,在民间广泛用于治疗RA,但目前关于“九味汤”成分分析及药理药效的研究鲜见报道。基于此,本研究拟通过网络药理学分析、UPLC-MS/MS方法及体外细胞实验,探究“九味汤”治疗RA的药效物质基础及作用机制。首先,通过网络药理学分析初步预测“九味汤”治疗RA的药效物质和作用机制。结果发现,TNF、IL-6、AKT等可能是“九味汤”治疗RA的关键靶点;槲皮素、黄芩素、汉黄芩素、阿魏酸、黄连素、山奈酚可能是“九味汤”发挥药效时具有重要作用的成分;“九味汤”抗RA的作用机制可能是通过调控炎症及细胞增殖相关的通路蛋白表达来实现的。其次,通过UPLC-MS/MS方法分析检测网络药理学预测的槲皮素、黄芩素、汉黄芩素、黄连素、阿魏酸和山奈酚等6种活性成分。建立能同时检测及定量“九味汤”提取物中6种活性成分的分析方法。在“九味汤”提取物中检测到了槲皮素、黄芩素、汉黄芩素和黄连素等4种成分,并对4种成分进行定量分析。再次,通过体外细胞实验探究“九味汤”治疗RA的作用机制。免疫印迹实验结果显示,“九味汤”能够降低AKT的磷酸化水平,增大Bax/Bcl-2的相对蛋白表达量,有效抑制MH7A细胞的增殖;酶联免疫吸附实验发现“九味汤”能够抑制TNF-α诱导的MH7A细胞上清液中的IL-6、IL-1β等炎症细胞因子的表达,具有良好抗炎作用。最后,在体外细胞实验中研究黄芩素和汉黄芩素在TNF-α诱导的MH7A细胞中的抗炎作用。酶联免疫吸附实验发现黄芩素和汉黄芩素均能有效降低TNF-α诱导的MH7A细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症细胞因子的含量。比较“九味汤”提取物及活性成分的效阈浓度发现,九味汤的药效作用是低浓度的活性成分协同作用结果。综上所述,中药复方“九味汤”抗RA作用是通过调节AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2等蛋白的表达,促进滑膜成纤维细胞的凋亡,降低TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子的分泌,抑制炎症来实现的。槲皮素、黄芩素、汉黄芩素、黄连素是“九味汤”中的关键活性成分,通过协同增效作用在MH7A细胞中发挥抗炎作用。