【摘 要】
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目的:死后淹没尸体的死亡时间推断有别于陆地尸体,体内腐败产生的化学物质受外界环境的影响较小,可以用于辅助判断死亡时间。机体死亡后,在微生物的作用下,蛋白质等含氮物质可被分解为氨、腐胺和尸胺等物质,随着死亡时间的推移,这些小分子含氮物质不断增加,并与死亡时间呈一定的相关性。本研究旨在利用衍生化的方法实现对死后浸没大鼠肝脏中氨及多胺的检测,探索其与死亡时间的关系;并在对氨的检测基础之上,开发一种酶法与
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.81671864）；
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目的:死后淹没尸体的死亡时间推断有别于陆地尸体,体内腐败产生的化学物质受外界环境的影响较小,可以用于辅助判断死亡时间。机体死亡后,在微生物的作用下,蛋白质等含氮物质可被分解为氨、腐胺和尸胺等物质,随着死亡时间的推移,这些小分子含氮物质不断增加,并与死亡时间呈一定的相关性。本研究旨在利用衍生化的方法实现对死后浸没大鼠肝脏中氨及多胺的检测,探索其与死亡时间的关系;并在对氨的检测基础之上,开发一种酶法与衍生化方法结合的气相色谱-质谱联用技术检测尿素的方法,以实现对尿素测定的方法学补充。研究方法:本研究分为三个部分。第一部分:取健康SD大鼠,颈椎脱位处死后分别淹没于自然环境下的河水（平均温度为28.1°C）和装有室温河水的水箱（平均温度为25°C）中,于不同时间取材并进行前处理操作,利用气相色谱-质谱法测定大鼠肝脏中氨的含量,并使用Origin 2018对不同死后淹没时间点肝脏中氨的含量进行拟合,得出拟合曲线。第二部分:取健康SD大鼠,颈椎脱位处死后分别于夏季与秋季淹没于自然环境的河水（夏季:28.1°C,秋季:13.3°C）与装有室温河水的水箱（夏季:25°C,秋季:15°C）中,分别于不同时间点对大鼠肝脏取材,经过衍生化处理后,利用气相色谱-质谱法检测肝脏中多胺的含量,并使用Origin 2018对不同死后淹没时间点大鼠肝脏中多胺的含量进行拟合,得出拟合曲线。第三部分:利用尿素酶将检材中的尿素分解为氨,再利用衍生化方法,使氨分子与衍生化试剂分子结合,通过标准对照的方法,利用气相色谱-质谱法检测氨衍生化产物的含量并计算求得样本中尿素含量。结果:方法优化部分:1.使用七氟丁酰氯对氨及多胺进行衍生化处理,在pH=14的氢氧化钠溶液中反应时,衍生化效果最好;2.衍生化温度应控制在40°C左右,可以使反应更加完全;3.萃取液应选用乙酸乙酯:正己烷（1:1）,可以解决萃取时发生乳化的问题,且萃取效果较好;4.七氟丁酰氯与氨和多胺的衍生化反应迅速,在5min时足以完全反应。动物模型部分:1.大鼠肝脏中氨的含量随着死后淹没时间的延长不断增加,室温河水组与自然环境河水组大鼠肝脏中氨的含量呈现相似的变化规律,均呈现先快和后慢再变快的趋势。2.大鼠肝脏中腐胺和尸胺含量随死后淹没时间的延长不断增加,亚精胺和精胺含量则下降。3.淹没环境温度越高,肝脏中氨、腐胺和尸胺的含量随死后淹没时间的增加速度越快。结论:1.死后淹没大鼠肝脏中的氨和多胺的含量变化与死后淹没时间具有相关性,有望为死后淹没尸体的死后间隔时间推断提供辅助作用。2.较高温度对死后淹没尸体肝脏中的氨、腐胺和尸胺的生成具有促进作用,而低温能够减缓三者的生成,这可能与微生物的增殖有关。3.采用酶-化学法结合,利用气相色谱-质谱联用仪检测尿素具有较高的灵敏度和专一性,操作简单,线性良好,有望解决法医鉴定中对尿素定性及定量困难的问题。
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