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我国早在60年代开始研究马鹿精液冷冻保存技术,有了较大的进展,但目前冻精受胎率仍较低,且我国自主研发的稀释液配方成分较复杂、难以推广应用,多数情况下仍采用进口稀释液,其成本高、受胎率差异较大;另外,由于鹿类繁殖生理基础研究滞后,发情排卵时间不清楚等原因,繁殖成功率低下,且目前国内外常用同期发情处理方案中母鹿至少需要麻醉3次,对母鹿损伤较大。因此,有必要优化马鹿精液冷冻保存稀释液配方及损伤较少的马鹿同期排卵-定时输精技术方法。基于此,本研究以圈养天山马鹿为试验对象,筛选优化国内外马鹿常用精液冷冻保存稀释液的基础上,初步研究不同同期排卵-定时输精方案对马鹿繁殖效率的影响,为今后我国马鹿人工繁殖技术的推广与应用提供参考。本研究包括2个研究内容:试验一:马鹿精液冷冻保存稀释液的筛选及其优化研究本试验对挑选的5种国内外马鹿精液冷冻保存稀释液进行了筛选及其优化研究。试验利用姬姆萨染色法、精子分析系统分别测定了精子活力、畸形率、顶体完整率、运动参数等。试验结果如下:1.为筛选马鹿精液冷冻保存最佳稀释液,本试验挑选了 5个国内外马鹿精液冷冻保存稀释液,分析不同稀释液配方对马鹿精子的冷冻保存效果。结果表明,配方Ⅰ精子解冻后活力为22.93%、存活时间为4.5h、存活指数为44.34、直线运动速率为8.8um/s、曲线运动速率为10.72um/s、头部侧摆幅值为3.19um,均显著大于其他各组(P<0.05)。2.为筛选马鹿精液冷冻保存稀释液最佳抗冻剂,本试验挑选了 3种抗冻剂甘油、卵黄、乙二醇,分析不同的抗冻剂对马鹿精液冷冻保存的效果。结果表明,甘油组精子解冻后活力为9.35%、存活时间为3.5h、存活指数为13.665,均显著大于其他各组(P<0.05)。3.为筛选马鹿精液冷冻保存稀释液甘油最佳浓度,本试验设计了 4%、5%、6%、7%4个浓度,分析不同浓度的甘油对马鹿精子的冷冻保存效果。结果表明,5%甘油浓度解冻后活力为11.1%、存活时间为3.5h、存活指数为18.65、直线运动速率为3.16um/s、曲线运动速率为4.8um/s,综合来看,5%甘油浓度好于其他各组。4.为筛选马鹿精液冷冻保存稀释液卵黄最佳浓度,本试验设计了 5%、10%、15%、20%、30%5个浓度,分析不同浓度的卵黄对马鹿精子的冷冻保存效果。结果表明,10%卵黄浓度解冻后活力为25.46%,存活时间为4.5h、存活指数为59.81、直线运动速率为5.05um/s、曲线运动速率为7.7um/s,综合来看,10%卵黄浓度好于其他各组。5.为筛选马鹿精液冷冻保存稀释液基础液最佳pH,本试验设计了 6.6、6.8、7.0、7.2、8.0 6个pH,分析基础液不同的pH对马鹿精子的冷冻保存效果。结果表明,pH6.8解冻后活力为37.65%,存活时间为4.51h、存活指数为80.9、直线运动速率为5.95um/s、曲线运动速率为8.68um/s,综合来看,基础液pH6.8好于其他各组。6.最终优化的稀释液配方:基础液(pH=6.8):Tris+一水柠檬酸+葡萄糖+三蒸水溶解(约50毫升)。稀释液:基础液+甘油5毫升+卵黄10毫升+青霉素10万单位+链霉素10万单位+三蒸水至100毫升。应用该稀释液配方进行马鹿精液冷冻保存试验,结果表明,解冻后精子活力为37.65%,37℃条件下存活时间为4.5h、存活指数为80.9、直线运动速率为5.95um/s、曲线运动速率为8.68um/s,均达到人工授精要求。试验二:不同同期排卵-定时输精程序对马鹿繁殖效果的影响本试验旨在探讨不同同期排卵-定时输精程序对马鹿繁殖效果的影响。选用40只健康、年龄相近的经产天山马鹿母鹿,随机分为5组,每组8只,分别按照CIDR+PMSG+A3为对照组、GnRH 0 d+PG 7 d+GnRH 48 h+16-24 h TAI 为试验 1 组、GnRH 0 d+PG 7 d+GnRH 48 h TAI 为试验 2 组、GnRH 0 d+PG 7 d+GnRH 72 h TAI 为试验 3 组、GnRH 0 d+PG 7 d+GnRH 56 h+16 h TAI为试验4组等程序化处理和定时人工授精并在处理前和人工授精时采集血样,测定血清中孕酮(P4)、雌激素(E2)、促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)的含量。结果表明,对照组、试验1组、试验2组和试验4组同期发情率(分别为100%、87.5%、87.5%、100%)极显著高于试验3组(37.5%)(P<0.01),但对照组和试验3组母鹿不返情率率(分别为75%、75%)极显著高于试验1组、2组、4组(分别为12.5%、37.5%、25%)(P<0.01),对照组和试验3组母鹿受胎率(分别为62.5%、50%)极显著高于试验1组、2组、4组(分别为12.5%、25%、25%)(P<0.01);各组处理后(输精时)的母鹿血清中E2、LH、P4和FSH含量整体极显著高于处理前(P<0.01),但各组之间均无显著性差异(P>0.05);试验组方法处理母鹿成本显著低于对照组。采用试验组方法处理母马鹿可保证较高的受胎率,且操作简单、成本低、有效避免母鹿反复麻醉损伤等优点,优于对照组方法。