目的:1.构建稳定表达的tandem-dimer Tomato(tdTomato)转基因小鼠并建系,观察其全身多器官组织的荧光表达情况,检测其生理生化指标有无异常,确保其符合实验小鼠的标准;2.提取tdTomato转基因小鼠的神经干细胞,观察其在活体细胞移植示踪实验中的荧光表达情况。初步尝试双色异体干细胞共培养实验,意在探究离体细胞培养以及分化时荧光表达的稳定性。方法:本实验分为两个部分。第一部分,使用Gateway clone技术构建tdTomato载体后,将过表达载体通过DNA显微注射法注入受精卵,然后移植至假孕母鼠体内,待其发育足月后自然生产。使用双向鉴定法鉴定并挑取阳性tdTomato转基因小鼠,置于山西医科大学实验动物中心的屏障环境中进行饲养,交叉配种繁殖并建系。送检生理生化指标检测,与正常野生小鼠进行统计学分析。第二部分,提取tdTomato转基因小鼠的神经干细胞培养至3代,随后移植到脊髓损伤小鼠模型的脊髓损伤部位进行示踪观察。另提取eGFP转基因小鼠的骨髓间充质干细胞和神经干细胞分别与tdTomato转基因小鼠的神经干细胞进行双色异体干细胞共培养实验,跟踪拍摄干细胞分化情况并观察两种荧光的表达情况。结果:成功构建了tdTomato转基因小鼠并建系,与野生型小鼠相比,tdTomato转基因小鼠生化指标和生长性状无明显差异,其组织切片及脑源神经干细胞均可观察到红色荧光。示踪实验表明注射部位可观察到明显的荧光成像,共培养实验可以清晰的观察到细胞分化后荧光的稳定表达。结论:tdTomato转基因小鼠的组织和细胞能稳定表达红色荧光,其阳性率会随着代数的繁殖而增加。常规的实验操作亦不会影响红色荧光的稳定表达,也能够支持细胞离体培养以及异色异体共培养的实验要求。以上实验结果表明tdTomato转基因小鼠是一种操作更便捷、实用性更高的荧光工具鼠,可以广泛应用于细胞水平的实验研究。