【摘 要】
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[目的]化合物GA13315（GA5）是从合成的一系列赤霉素衍生物中筛选出的新四环二萜类化合物。我们前期研究发现,GA5不但具有明显的体内外抗肿瘤活性,且具有良好的安全性,同时GA5还显示出明显的逆转肿瘤细胞多药耐药性的特点,尤其是其单独作用对多药耐药细胞MCF-7/Adr的活性明显优于对敏感细胞株MCF-7的活性。为此我们对不同条件下的耐药细胞进行转录组测序（RNA-Seq）,发现GA5克服肿瘤
【基金项目】
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国家自然科学基金（N0.81160405）; 国家自然科学基金（NO.81460559）
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[目的]化合物GA13315（GA5）是从合成的一系列赤霉素衍生物中筛选出的新四环二萜类化合物。我们前期研究发现,GA5不但具有明显的体内外抗肿瘤活性,且具有良好的安全性,同时GA5还显示出明显的逆转肿瘤细胞多药耐药性的特点,尤其是其单独作用对多药耐药细胞MCF-7/Adr的活性明显优于对敏感细胞株MCF-7的活性。为此我们对不同条件下的耐药细胞进行转录组测序（RNA-Seq）,发现GA5克服肿瘤细胞多药耐药可能是通过上调骨形态发生蛋白6（BMP6）的表达而实现。本研究在前期基础上,对GA5通过上调BMP6表达克服肿瘤多药耐药性的作用机制进行了研究。[方法]1.以DOX诱导的MCF-7/Adr细胞为肿瘤多药耐药模型,采用MTT法检测化疗药物和GA5对其增殖的抑制活性;2.利用qRT-PCR和Western blot验证RNA-Seq筛选出的差异性表达基因BMP6;3.通过慢病毒转染构建MCF-7/Adr细胞的BMP6过表达模型,经qRT-PCR和Western blot对细胞模型进行验证;再通过MTT法研究BMP6与MCF-7/Adr多药耐药性的关系;4.通过慢病毒转染构建MCF-7/Adr细胞的BMP6低表达模型,经qRT-PCR和Western blot对细胞模型进行验证;再通过CCK-8法及Western blot研究GA5通过调控BMP6、克服MCF-7/Adr多药耐药的作用;5.通过Western blot研究GA5通过上调BMP6、抑制ERK蛋白活化、进而抑制P-gp表达,最终实现克服MCF-7/Adr多药耐药的作用机制。6.通过免疫组化在移植瘤中进一步证实GA5最终实现克服MCF-7/Adr多药耐药的作用机制。[结果]1.体外验证结果显示:MCF-7/Adr细胞具有多药耐药性特征;GA5对耐药细胞MCF-7/Adr具有更强的抑制活性,与前期结果相一致;2.体内实验中,我们以抑瘤率（%）、肿瘤生长曲线和肿瘤相对增殖率（T/C%）为指标,评价了 GA5的抑瘤作用,结果显示,在MCF-7和MCF-7/Adr裸鼠移植瘤,GA5对MCF-7/Adr具有更强的体内抑制作用,与体外实验结果相吻合;3.对前期转录组测序（RNA-Seq）结果验证显示:MCF-7/Adr中BMP6的表达明显下调;GA5明显上调耐药细胞MCF-7/Adr中的BMP6表达;4.采用已构建的MCF-7/Adr细胞BMP6低表达模型,研究GA5是否通过上调BMP6表达、发挥克服耐药的作用,结果显示,GA5可提高细胞BMP6的表达水平,且GA5克服耐药性的作用与BMP6的表达呈正相关,表明GA5通过上调BMP6的表达克服MCF-7/Adr的耐药性;5.机制研究发现,GA5通过上调耐药细胞MCF-7/Adr中BMP6的表达、抑制ERK蛋白活化、进而降低P-gp表达。但GA5不能通过上调BMP6、调控microRNA-192的表达来实现克服MCF-7/Adr的多药耐药性。[结论]1.耐药细胞MCF-7/Adr的多药耐药性（MDR）与细胞中骨形态发生蛋白6（BMP6）的低表达、ERK蛋白的激活、耐药相关膜转运蛋白P-gp的高水平表达密切相关;2.化合物GA5通过上调耐药细胞MCF-7/Adr中BMP6的表达、抑制ERK蛋白活化、进而降低P-gp表达,最终发挥克服肿瘤细胞化疗耐药的作用。
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