吉林人参bZIP转录因子基因家族系统分析及PgbZIP48-3基因功能的初步验证

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人参是一种名贵的药用植物,被誉为“百草之王”,人参皂苷为其主要活性成分,具有广泛的药理作用和深远的市场应用前景。bZIP转录因子是真核生物转录因子中最大最保守的家族之一,迄今为止,已经在多种植物中鉴定出了bZIP转录因子,它可以参与到植物的多种生理过程以及植物对胁迫的响应中,但是未见对人参bZIP转录因子的相关研究报道。本研究以吉林人参248,993条Unigenes数据库为基础,对bZIP转录因子进行了鉴定及系统分析,筛选出一条与人参皂苷合成密切相关的基因,对其功能进行验证,填补了bZIP转录因子在人参中研究的空白。得到以下结果:1.在吉林人参中共鉴定出包含273条Unigenes的91条bZIPs基因,将其命名为PgbZIPs,其中,具有完整ORF并且结构域在ORF内的有190条Unigenes,属于62条PgbZIPs基因。2.进化分析显示PgbZIPs分为10个亚家族,进化较为保守;结构分析支持以上结果,且PgbZIPs具有20个motifs,不同亚家族间结构差异较大,同一亚家族的基因具有相似的结构特征。3.GO注释显示PgbZIP Unigenes显著富集到四个亚功能,包括转录、DNA模板化(transcription,DNA-templated)、基因表达调控(regulation of gene expression)、核酸结合转录因子活性(nucleic acid binding transcription factor activity)和DNA结合(DNA binding)。4.表达分析显示PgbZIP Unigenes在人参的14个组织部位、42个农家品种和四个年生的人参根中均有特异性表达,表明PgbZIPs的表达具有时空特异性;互作分析发现PgbZIP Unigenes形成了一个共表达网络,表明PgbZIPs之间的协调互作。5.模拟干旱胁迫,选取6条不同亚家族PgbZIPs基因进行荧光定量分析发现,PgbZIP家族基因在干旱胁迫的响应中具有重要作用。6.筛选出一条与皂苷含量紧密相关的基因-PgbZIP48-3,对其进行理化性质分析,并构建了超表达载体和干扰载体。7.将包含PgbZIP48-3的超表达载体和干扰载体利用发根农杆菌分别转入人参实生苗,成功诱导出转基因人参发状根,转PgbZIP48-3基因超表达载体转化的发状根诱导率为1.3%;转PgbZIP48-3基因干扰载体转化的发状根诱导率为1.2%。经检测超表达载体转化的发状根中转化率为26.3%。8.经检测发现超表达PgbZIP48-3基因可影响人参皂苷的含量。
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