【摘 要】
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目的:本实验通过使用醋酸去氨加压素制备豚鼠内淋巴积水动物模型,通过检测P-P38MAPK与AQP2两个蛋白表达情况,观察P38MAPK特异性抑制剂SB203580对内淋巴积水程度的影响,探讨P38MAPK是否通过调控AQP2参与内淋巴积水的形成。方法:筛选阈值小于40d B SPL和DPOAE通过的合格健康花色豚鼠30只,随机分为三组:空白对照组（6只）:腹腔注射生理盐水,剂量与积水组一致,连续1
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目的:本实验通过使用醋酸去氨加压素制备豚鼠内淋巴积水动物模型,通过检测P-P38MAPK与AQP2两个蛋白表达情况,观察P38MAPK特异性抑制剂SB203580对内淋巴积水程度的影响,探讨P38MAPK是否通过调控AQP2参与内淋巴积水的形成。方法:筛选阈值小于40d B SPL和DPOAE通过的合格健康花色豚鼠30只,随机分为三组:空白对照组（6只）:腹腔注射生理盐水,剂量与积水组一致,连续10天;积水组（12只）:腹腔注射醋酸去氨加压素6μg/kg/d,连续10天;抑制剂组（12只）:腹腔注射醋酸去氨加压素6μg/kg/d,15min后腹腔注射SB203580 30μg/kg/d,连续10天。所有组别豚鼠在停止给药7天后行ABR和DPOAE检测,并在检测后同时取材,HE染色观察各组豚鼠内淋巴积水程度,免疫组织化学和实时荧光定量PCR分别检测P-P38MAPK、AQP2蛋白和m RNA在各组豚鼠耳蜗表达情况。结果:1、行为学观察及听力检测:各组豚鼠在实验全程未出现听力反应迟钝、步态不稳、畏寒微光、自发性眼震等症状和体征,给药前后ABR阈值与DPOAE检测无明显改变。2、形态学观察:通过HE染色法观察各组豚鼠内淋巴积水程度,空白对照组积水率为0%;积水组12只豚鼠耳蜗切片中,9例出现膜迷路积水,积水率为75%,其中重度积水1例,中度积水2例,轻度积水6例;抑制剂组12只豚鼠耳蜗切片中,4例出现膜迷路积水,积水率为33%,其中轻度积水4例,无中、重度积水。3、免疫组化:P-P38MAPK:P-P38MAPK在各组豚鼠耳蜗中均有表达,广泛表达于血管纹（St V）、螺旋韧带（SPL）、前庭膜（RM）、Corti,s器（OC）、螺旋缘（SLM）、螺旋神经节（SG）。各组同组组内比较,螺旋神经节相对于其他部位表达较弱,差异有统计学意义（p<0.01）;余部位表达无明显差异。各组间比较而言,积水组和抑制剂组P-P38MAPK在同一部位表达相对于空白对照组都显著增强,其中积水组表达量又高于抑制剂组,差异均具有统计学意义（p<0.01）。AQP2:AQP2在各组豚鼠耳蜗中均有表达,广泛表达于血管纹（St V）、螺旋韧带（SPL）、前庭膜（RM）、Corti,s器（OC）、螺旋缘（SLM）、螺旋神经节（SG）。在螺旋神经节处,各组AQP2表达量无显著差异（p=0.365）;除螺旋神经节外,积水组和抑制剂组豚鼠耳蜗AQP2在同一部位表达相对于空白对照组都显著增强,其中积水组表达量又高于抑制剂组,差异具有统计学意义（p<0.01）。4、荧光定量PCR检测结果:P38MAPK:和空白对照组相比,积水组和抑制剂组豚鼠耳蜗P38MAPK m RNA表达量都显著增强;积水组和抑制剂组相比较,积水组表达量又高于抑制剂组,差异均具有统计学意义（p<0.01）。AQP2:和空白对照组相比,积水组和抑制剂组豚鼠耳蜗AQP2 m RNA表达量都显著增强;积水组和抑制剂组相比较,积水组表达量又高于抑制剂组,差异均具有统计学意义（p<0.01）。结论:1.醋酸去氨加压素全身应用可诱导形成内淋巴积水;2.内淋巴积水主要源于血管纹、螺旋韧带、前庭膜、Corti,s器、螺旋缘等处的AQP2诱导,螺旋神经节可能并不参与内淋巴积水;3.P38MAPK通过调控AQP2参与内淋巴积水的形成;P38MAPK抑制剂可减轻内淋巴积水程度。
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