鸡马立克氏病(MD)是一种鸡的高度传染性肿瘤病,该病以淋巴组织增生和肿瘤转化为特征。MD病原为鸡马立克氏病病毒(MDV),MDV感染可以直接导致宿主死亡和生产性能降低,并且间接导致免疫抑制。MDV广泛流行于世界各地养禽的国家和地区,对养禽业造成了巨大的经济损失。MD的防控手段主要是疫苗免疫预防,但是MD疫苗并不能诱导清除性免疫,MDV野毒株和疫苗株可以共存于宿主体内,并不断复制和排毒,导致MDV野毒株的不断进化。虽然我国实行MD普遍免疫,但近年来各地常有MD发生,给养禽业造成巨大危害。因此有必要了解我国MDV的流行情况,并对MDV野毒株进行分离鉴定,进一步研究其生物学特性,分析其进化规律。这些研究对于MDV的基础研究和MD防控均有重要意义。本研究中,我们对2015年8月至2016年7月收到的来自15省份的489份临床疑似MD病料进行了检测,MDV阳性率达到42.7%,MDV阳性病料中混合感染禽网状内皮组织增生征病毒(REV)、禽传染性贫血病毒(CIAV)和禽白血病病毒(ALV)的占比分别为12.6%、17.5%和1.8%。对部分MDV单独阳性的病料进行病原的分离鉴定,获得4株MDV细胞适应毒株,分别命名为BC/15、HLD/16、JL/16和SY/15。PCR鉴定发现BC/15和HLD/16具有MDV野毒株特点,而JL/16和SY/15具有MDV疫苗或弱毒株特征。基于meq基因的遗传进化分析发现,BC/15和HLD/16与绝大多数MDV中国分离致病毒株处于同一进化分支,并且两者单独形成新的进化分支;而JL/16和SY/15与早期中国分离毒株J-1、疫苗株CVI988和814以及弱毒株CU-2处于同一近化分支。这些结果表明具有不同遗传特征的MDV毒株在我国流行,且MDV毒株依然在不断进化。2015年,本实验室于吉林省一个CVI988疫苗免疫后发生MD的鸡群中分离得到一株MDV毒株BS/15。通过PCR和IFA鉴定发现MDV BS/15具有MDV野毒株特征,进一步对其meq、vIL-8、pp38和ICP4等4个致病相关基因进行序列对比发现MDV BS/15符合中国分离致病毒株的遗传特征,拥有多个MDV中国分离毒株特有的突变。为了研究BS/15的致病性以及评价疫苗对其保护效果,我们比较了MDV BS/15和MDV参考毒株-超强毒(vvMDV)Md5在SPF鸡中的致病性,并比较评价了在我国应用最广泛的CVI988和814疫苗对这两个毒株的保护效果。结果表明,在攻毒后90 d试验期内,MDV BS/15和Md5都能导致100%SPF鸡发生MD,两者引起的死亡率相似,分别为85.7%和80.0%。MDV BS/15攻毒组肿瘤率达到64.3%,高于Md5攻毒组40.0%的肿瘤率。但是相对于Md5感染鸡,BS/15感染鸡的存活时间更长,生长发育障碍较轻微,免疫器官损伤程度相似。这些结果表明MDV BS/15毒力与Md5大致相似,但是其致病特征发生改变。值得关注的是,CVI988和814疫苗对BS/15的保护指数分别为33.3和66.7,而两种疫苗对Md5的保护指数分别为92.9和100。这表明两种疫苗虽然对超强毒力的Md5保护效果良好,但都不能对BS/15提供足够的保护,尤其是CVI988疫苗。这些数据MDV BS/15具有“延迟毒力”和超高疫苗抗性的特征。该研究表明我国存在MDV变异毒株,这些毒株的流行可能是现地MD免疫失败的原因之一。该研究能够帮助我们了解我国MDV流行毒株的致病特征和进化特征。本研究中分析了MDV感染鸡中枢免疫器官干扰素的表达,并首次比较分析了不同MDV毒株(BS/15和Md5)感染鸡中宿主干扰素的差异表达。研究发现MDV感染可显著抑制SPF鸡法氏囊和胸腺中IFN-α和IFN-β的表达。在MDV感染前期IFN-γ显著上调表达,而后IFN-γ显著下调表达,这些结果表明MDV能够影响宿主先天免疫系统并抑制干扰素表达,从而逃避宿主抗病毒作用。另外,不同MDV毒株感染对宿主干扰素差异表达的影响作用显著不同,这可能与MDV毒株之间不同的致病特征和疫苗抗性具有一定相关性。为了进一步分析不同毒株的感染进程,本研究建立了检测MDV基因组在宿主染色体整合的荧光原位杂交方法(FISH),检测了体内感染模型中MDV基因组在宿主染色体中的整合情况,首次分析了不同MDV毒株(BS/15和Md5)在宿主染色体整合的规律。结果表明不同MDV毒株在宿主染色体中的整合规律不同。综合MDV BS/15和Md5致病性的研究结果,提示不同MDV毒株在宿主染色体中整合能力的差异与其致病特征具有一定的相关性。综上所述,本研究对我国部分MDV流行毒株进行了检测、分离、鉴定和分析;系统研究了MDV中国分离毒株BS/15的生物学特性;分析了MDV感染引起的宿主干扰素的差异表达;研究了MDV在宿主染色体整合的规律。这些研究结果有助于了解我国MDV的流行情况、致病特征和进化特点,对我国MD防控具有重要的指导意义,同时该研究为MDV的基础研究提供了数据和材料支持。