猪瘟是危害我国养猪业发展的重要动物疫病之一,其病原体猪瘟病毒(Classical swine fever virus)属于黄病毒科瘟病毒属,发病主要特征是高温、微血管变性而引起全身出血、坏死、梗塞。CSFV在所有外周血单核细胞亚群中都复制,病毒感染较集中于单核细胞和肺泡巨噬细胞。巨噬细胞是一类重要的先天性免疫细胞,在不同微环境和细胞因子的作用下,巨噬细胞可活化成两种不同的表型,即经典活化型巨噬细胞(Classically Activated Macrophages,CAM或简称M1)和替代活化型巨噬细胞(Alternatively Activated Macrophages,AAM或简称M2),而向M1/M2表型转变的过程称为极化(Polarization)。目前,巨噬细胞极化是否对CSFV的复制产生影响尚不清楚。本实验旨在研究猪的巨噬细胞极化与病毒复制之间的关系,即CSFV感染后对巨噬细胞极化产生什么样的影响,以及极化的巨噬细胞对CSFV复制有何影响。本试验首先通过支气管灌肺的方法提取猪的原代肺泡巨噬细胞(PAM),并用间接免疫荧光法检测其细胞纯度高达90%以上,从而建立了从猪的肺泡灌洗液中分离高纯度PAM的培养体系。其次,分别用刺激因子LPS+IFN-γ、IL-4刺激静息状态下的PAM使其极化成不同的亚型,通过蛋白水平、Griess法和精氨酸酶活性试验证明PAM体外极化模型的成功构建,即建立了PAM向M1和M2型极化的识别体系。此外,本实验发现CSFV石门株在感染PAM后的不同时间点可检测到极化相关因子转录水平发生上调,且不同时间点中M1型特征性标记分子的转录水平高于M2型,即CSFV对PAM的感染可诱导PAM向M1型极化发展,且CSFV在感染PAM 24 h后极化成M1型巨噬细胞的趋势更明显。更重要的是,本实验发现CSFV在感染不同亚型的PAM后,通过间接免疫荧光试验观察CSFV的E2蛋白表达情况,发现PAM向M1型的极化可抑制CSFV的E2蛋白表达,从而抑制病毒的复制,即M1型PAM对CSFV的复制存在一定的抑制作用。本实验不仅为研究CSFV的宿主免疫提供了重要的线索,而且为设计基于巨噬细胞极化亚型防治CSFV新策略提供一定依据。