微纳米技术在DNA检测与抗体纯化中的应用

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目前,微纳米技术在分析检测中的应用越来越多。纳米材料与DNA结合在疾病的诊断与治疗中发挥着重要的作用。基于金纳米粒子和荧光量子点独特的一系列物理、化学性质,特别是其生物相容性,它们在生物分析领域有广泛的应用。聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)是一种体外特定核酸序列扩增技术,是现代分子生物学实验的工作基础之一,在生命科学、遗传学和医学等领域发挥着重要作用。在本论文中,把金纳米粒子和荧光量子点应用于PCR过程中,实现界面PCR扩增,建立了DNA检测的新方法。金纳米粒子对荧光量子点在一定距离内有荧光淬灭作用,在本论文研究中选用了不同DNA扩增长度(50~1003bp)的核酸片段,不同扩增长度的上游和下游引物通过不同的化学键作用被偶联到金纳米粒子和量子点表面上,在PCR的作用下,量子点和金纳米粒子通过双链DNA连接起来,在这个过程中,金纳米粒子对量子点会产生荧光淬灭作用,荧光淬灭程度根据金纳米粒子与量子点之间的距离不同而不同,也就是两个粒子之间双链DNA长度的不同。作为新方法、新理论的研究,我们根据在PCR后金纳米粒子对量子点荧光淬灭程度的不同,从而可以建立荧光强度与DNA长度之间的线性关系,结论是随着金纳米粒子和量子点两个粒子之间距离的增大(50~1003bp),荧光淬灭作用逐渐减弱,建立DNA检测的标准曲线,并应用于病原微生物实际样品的检测。聚苯乙烯微球是一种优良的载体,在聚苯乙烯微球表面引入羧基、氨基、羟基或者其它官能团,可用于蛋白质等生物大分子及有机小分子的固定化。在本论文中,我们用制备的氨基聚苯乙烯微球对克伦特罗抗体的纯化效果进行了研究,并与普通的饱和硫酸铵沉淀法的纯化效果进行了比较,采用传统的ELISA方法对各自纯化后的抗体进行了检测,得到微球法纯化的抗体效价在218700,而饱和硫酸铵沉淀法纯化的抗体效价为72900,所以前者纯化抗体的效果较好。
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