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乳酸菌是人体肠道中重要的益生菌,具有提高机体免疫、维持肠道菌群稳态的功能。本文就三株乳酸菌:植物乳杆菌14917(Lactobacillus plantarum14917)、嗜酸乳杆菌ATCC4356(Lactobacillus acidophilusATCC4356)、罗伊氏乳杆菌DMSZ8533(Lactobacillus reuteriDMSZ8533)为研究对象,通过体外实验筛选出对胃肠道耐受力、黏附力均较强的乳酸菌,研究并探讨其是否对小鼠的免疫应答、肠道菌群调节两方面存在性别差异。 1、乳酸菌胃肠道耐受性与黏附力的体外研究。比较三株乳酸菌的耐酸耐胆能力、体外疏水力与黏附力。结果表明,L.reuteriDMSZ8533在人工胃肠液中处理7h后,活菌数仅下降了1.8个log值,耐受力最强;L.reuteri的表面疏水力(67.86%)与对猪胃黏蛋白的黏附力(26.34%)均高于L.plantarum与L.acidophilus,且具有统计学意义(P<0.05),此外,L.reuteri也具有中等的对Caco-2细胞的黏附力(3.82%)。 2、罗伊氏乳杆菌对小鼠免疫调节作用的研究。将36只BALB/c小鼠随机分成3组,雌雄各半,分别为对照组、低剂量组、高剂量组。低剂量组、高剂量组小鼠分别每天每只灌胃0.4mL含108CFU/mL、1010CFU/mL的L.reuteri DMSZ8533的脱脂乳悬液,对照组每天灌胃等量的脱脂乳。干预4周后,测定各组小鼠的免疫器官指数、血清IL-12、TNF-ɑ的分泌水平、回肠中T淋巴细胞的数量。结果表明,低剂量干预组的雌雄小鼠血清中IL-12含量分别为123.81pg/mL与122.44pg/mL,均显著高于对照组(P<0.05),但雌雄之间无显著差异(P>0.05);高剂量的L.reuteri均可提高雌雄小鼠回肠中CD8阳性细胞的数量,且雌雄之间存在显著性差异(P<0.05);低剂量、高剂量干预组的雌鼠回肠中CD3+T、CD4+T细胞的数量分别较对照组提高了23.59%与13.5%、20.11%与18.50%,而雄鼠低剂量、高剂量干预组CD3+T细胞的数量较对照组下降了11.25%、19.5%,高剂量干预组CD4+T细胞数量较对照组下降了4.42%。 3、结合高通量测序,探究罗伊氏乳杆菌对小鼠肠道菌群结构、物种丰度与多样性的影响。结果表明在菌群结构上,低剂量、高剂量的L.reuteri对雌鼠肠道菌群Alpha多样性指数无显著影响(P>0.05),但高剂量的L.reuteri较低剂量显著降低了雄鼠肠道菌群的多样性,且组间差异显著(P<0.05);低剂量L.reuteri干预的雄鼠肠道菌群Richness与Shannon指数均显著高于雌鼠(P<0.05);肠道菌群组成在门水平上,低剂量、高剂量干预组的雌鼠肠道内拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度较对照组增加,厚壁菌门(Firmicutes)丰度下降,而雄鼠中恰好呈相反趋势。但低剂量、高剂量干预组的雌雄小鼠在门水平的肠道菌群上不存在显著性差异(P>0.05);在属水平上,低剂量、高剂量的L.reuteri增加了雌鼠肠道中拟杆菌属(Bacteroides)、普氏菌属(Prevotella)、乳酸乳球菌属(Lactococcus)的丰度,降低了梭状芽孢杆菌属ClostridiumXlVa、ClostridiumIV的丰度,而在雄鼠中,上述菌群丰度变化恰好呈相反趋势;且低剂量组小鼠肠道中的乳酸杆菌属(Lactobacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、Acetobacteroides的丰度存在显著的雌雄差异(P<0.05)。