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研究背景:急性肺损伤（acute lung injury,ALI）及其后期发展的急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）是一种以进行性低氧血症、呼吸窘迫和非心源性肺水肿为主要特征的临床综合征,ALI/ARDS的病死率高达40%。微小RNA（microRNAs,miRNAs）是一类由内源性基因编码的长度约为19-22个核苷酸的非编码RNA,通过与靶基因的mRNA直接结合来抑制靶基因的表达。研究表明miR-144/451调节免疫细胞功能,参与肺的炎症性疾病发生发展。在本研究中,我们利用miR-144/451基因敲除（miR-144/451 KO）小鼠研究miR-144/451缺失时对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的ALI小鼠和巨噬细胞炎症和氧化应激的影响。同时观察黄葵胶囊抗LPS诱导的小鼠ALI的作用和对肺miR-451的表达的影响。目的:（1）利用miR-144/451 KO小鼠,探究miR-144/451在LPS诱导的小鼠ALI中的作用（2）利用miR-451过表达Raw264.7细胞和miR-144/451 KO小鼠的巨噬细胞研究miR-144/451在LPS诱导的巨噬细胞炎症反应和氧化应激中的作用和机制（3）探讨黄葵胶囊对LPS诱导的ALI小鼠和肺miR-451的调节作用方法:（1）miR-144/451在LPS诱导的ALI小鼠中的作用将C57BL/6小鼠和miR-144/451 KO小鼠分为4组,分别为对照组（WT-Ctl和KO-Ctl）和LPS组（WT-LPS和KO-LPS）。模型组采用LPS经气管滴注,对照组动物滴注等量生理盐水。24 h后,测定肺泡灌洗液中的细胞总数、TNF-α和IL-6的含量。HE染色观察小鼠肺组织形态学变化。测定肺组织均浆中的中性粒细胞过氧化物酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性。测定WT-Ctl和WT-LPS组小鼠肺组织中的miR-144和miR-451的表达。（2）miR-144/451在LPS诱导的巨噬细胞炎症反应和氧化应激中的作用和机制采用miR-451 mimics过表达小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞。检测细胞Rac-1 mRNA和蛋白表达水平。ELISA法检测LPS刺激miR-451过表达细胞分泌的TNF-α和IL-6的含量。荧光法测定LPS刺激前后胞内ROS水平。分离小鼠的原代腹腔巨噬细胞,检测LPS刺激WT小鼠原代腹腔巨噬细胞24 h后miR-451的表达;检测LPS刺激的WT和miR-144/451 KO小鼠的原代腹腔巨噬细胞的Rac-1 mRNA和蛋白水平。最后,分离小鼠肺泡巨噬细胞,ELISA法检测LPS刺激的WT和miR-144/451 KO小鼠肺泡巨噬细胞分泌的TNF-α和IL-6的含量;荧光法测定LPS刺激前后胞内ROS水平;并检测Rac-1抑制剂NSC23766干预LPS诱导的WT和miR-144/451 KO小鼠肺泡巨噬细胞的作用。（3）黄葵胶囊对LPS诱导的ALI小鼠和肺miR-451的调节作用C57BL/6小鼠分为对照组、LPS组、阳性药物地塞米松（dexamethasone,DEX）组和黄葵胶囊组（600 mg/kg、300 mg/kg和150 mg/kg）。黄葵胶囊组动物连续给药5天。第6天,小鼠经气管滴注LPS。对照组动物注射生理盐水。阳性药物地塞米松组在造模前30min腹腔注射给药1次。24h后处死动物。测定肺湿重/干重比、血浆IL-6的含量、肺泡灌洗液中的细胞总数、TNF-α和IL-6的含量。HE染色观察小鼠肺组织形态学变化。测定肺组织均浆中的中性粒细胞过氧化物酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性。qRT-PCR法检测肺组织miR-451表达水平。采用LPS诱导Raw264.7细胞和原代腹腔巨噬细胞。将巨噬细胞分为对照组、LPS组、DEX组、黄葵胶囊组（25、50、100和200 μg/m）,加黄葵胶囊和LPS 24 h后取上清测定NO、TNF-α和IL-6含量,检测胞内ROS、细胞TNF-α和IL-6 mRNA水平。结果:（1）miR-144/451抑制LPS诱导的小鼠ALI与WT-Ctl比较,LPS诱导的WT-ALI小鼠肺中miR-451的表达水平显著下调,而miR-144的表达没有变化。miR-144/451 KO小鼠在LPS诱导的ALI后炎症反应和氧化损伤加重。与WT-LPS组比,KO-LPS组肺组织炎症评分加重,BALF中总细胞数、中性粒细胞数、TNF-α和IL-6含量均显著升高,肺组织中性粒细胞过氧化物酶活性显著上升,肺组织过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性降低。（2）miR-144/451抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应和氧化应激在过表达miR-451的Raw 264.7细胞,细胞Rac-1的mRNA和蛋白水平降低。在LPS刺激后,过表达miR-451的Raw 264.7细胞上清中的TNF-α、IL-6含量和胞内ROS水平降低。LPS刺激WT小鼠腹腔巨噬细胞后miR-451下调;而与WT鼠比较,miR-144/451 KO小鼠的腹腔巨噬细胞Rac-1的mRNA和蛋白水平上调。在WT和miR-144/451 KO鼠肺泡巨噬细胞,LPS刺激后miR-144/451 KO鼠肺泡巨噬细胞上清中的TNF-α、IL-6含量和胞内ROS水平较WT鼠的升高;Rac-1抑制剂可以降低LPS刺激的miR-144/451 KO小鼠肺泡巨噬细胞TNF-α的产生和ROS水平,但对IL-6的产生无明显影响。（3）黄葵胶囊抑制LPS诱导的小鼠ALI和上调肺miR-451表达与模型组相比,黄葵胶囊给药组显著改善肺组织中性粒细胞浸润;小鼠肺泡灌洗液中的总细胞数和中性粒细胞数降低,TNF-α和IL-6含量降低;血浆IL-6含量降低;肺组织中性粒细胞过氧化物酶活性降低,肺组织过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性升高,以及上调肺组织中miR-451的表达。在体外模型中,与LPS组相比,黄葵胶囊组可以降低Raw264.7和原代腹腔巨噬细胞释放NO、分泌TNF-α和IL-6的含量,降低细胞TNF-α和IL-6 mRNA水平降低,在原代腹腔巨噬细胞也能够抑制NO释放、TNF-α和IL-6的分泌。结论:（1）miR-144/451基因敲除加重LPS诱导的小鼠ALI（2）miR-451通过下调Rac-1抑制巨噬细胞炎症反应和氧化应激（3）黄葵胶囊抑制LPS诱导的ALI小鼠和巨噬细胞炎症反应和氧化应激,并上调肺miR-451 表达