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日本脑炎（Japanese encephalitis,JE）是由日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的一种重要的人畜共患传染病,在全世界范围内引起严重的危害,每年造成大约6-8万人感染,大约1.5-2万人死亡。猪-蚊-猪循环是乙脑传播的主要方式,猪是中间宿主和扩增宿主。乙脑感染猪时可引起母猪流产、木乃伊胎和公猪睾丸炎等,并在扁桃体中长期带毒。猪作为JEV的扩增宿主,能够长时间产生病毒血症,是病毒传播和流行的基础。但目前猪作为储存宿主的原因仍然未知。扁桃体是猪在感染乙脑时关键的带毒器官,能够长期携带病毒,可能与猪持续产生病毒血症有关。同时,猪扁桃体也是多种猪病原体的携带器官,多种重要的猪病原体可长期存在于扁桃体中,然而由于缺少猪源扁桃体细胞系阻碍了相关研究的开展。本实验构建了一种猪扁桃体传代细胞系（Pig tonsil cell,PT）,分析了该细胞系对猪主要病原体的易感性。发现PT细胞可以对JEV和猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）易感。然后分析了JEV对PT细胞的感染过程,发现PT细胞在病毒受体和表面抗病毒分子表达上的一些特性可能影响着病毒的感染。进一步,还通过RNA-Seq深度测序比较了猪源细胞系:猪扁桃体细胞（PT）,猪睾丸细胞（ST）和猪髋动脉内皮细胞（PIEC）在JEV感染后的基因表达差异,对PT持续带毒的机制进行了进一步的分析。第一,分离SPF猪的腭扁桃体,取腭扁桃体上皮原代细胞。对原代细胞进行初步鉴定,保证细胞PCK免疫荧光染色为阳性,不含猪感染性病原体:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。然后采用慢病毒感染的方法转入SV40质粒,传代培养10代后再进行嘌呤霉素筛选。对经过嘌呤筛选并鉴定为阳性的扁桃体上皮细胞系扩大培养,构建成永生化细胞系,命名为PT。对构建好的细胞系进行培养方法的优化,生物学和形态学鉴定,结果表明已成功建立了传代细胞系,并且具备基本的实验功能。第二,检测PT细胞对猪重要感染性病原体（PRRSV、CSFV、PCV2、PEDV、PRV、JEV）的易感性。用5 MOI（Mμltiplicity of infection）纯化后的病毒接种PT细胞,对接种后的细胞进行实时定量PCR和TCID50检测。结果表明PT细胞对PRRSV、PCV2、PEDV、PRV不易感,接种后48小时的细胞中不能检出病毒核酸和病毒粒子。CSFV和JEV则可以感染PT细胞,病毒核酸和病毒粒子可在PT细胞中检出。其中,PT细胞对JEV更加易感,接种后48小时可产生高滴度的JEV粒子。说明PT细胞可用于JEV及CSFV相关实验研究。第三,分析了JEV感染PT细胞的过程和特性。通过比较JEV入侵几种猪源细胞系的过程,发现JEV更容易入侵PT细胞。分析JEV受体分子证明:LMAN2L可能是JEV入侵PT细胞的主要病毒受体。还对细胞表面影响病毒入侵感染的分子IFITM3进行了研究,结果显示PT细胞表面IFITM3水平较低,JEV感染后的PT细胞中IFITM3呈低水平变化。该研究揭示了JEV感染扁桃体的过程和特征,并初步解释了JEV持续性感染的原因。第四,通过RNA-Seq深度测序比较分析了猪源细胞系（PT,ST和PIEC）在感染JEV后的基因差异表达。发现感染后的PT细胞与ST,PIEC细胞存在抗病毒应答,免疫应答方面的差异。JEV感染能够诱导PT细胞先天性免疫应答（干扰素刺激基因）的上调,但是先天性免疫应答基因的作用有限,抗病毒能力不强,无法完全清除细胞中的JEV。本研究首次建立了猪源扁桃体传代细胞系,分析了细胞的生物学特征,并在猪病原体持续感染方面进行了探索。为猪病原体,特别是JEV的持续感染和宿主传播奠定基础,也拓展了猪病学和猪生物学的研究模型。