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蜱是一类重要的吸血体外寄生虫,绝大多数寄生在哺乳动物体表,少数寄生在鸟类、爬行类及两栖类,蜱不但吸食大量血液,损害宿主皮肤,而且可以在叮咬过程中传播多种病原体,是人和动物许多重要疾病的传播媒介。在蜱的吸血过程当中,唾液腺是病原体传播给宿主的通道,是蜱及蜱传病防治中关键的靶器官。雌蜱的唾液腺在蜱吸血末期和饱血后会发生快速的退化,这一现象主要是由唾液腺细胞凋亡等程序化细胞死亡机制引起的。本论文选择唾液腺中发现的凋亡抑制分子(Inhibitor of Apoptosis Protein,IAP),探索其在蜱唾液腺细胞凋亡的作用,并通过RNA干扰技术研究其功能和应用潜力。研究对象为镰形扇头蜱,一种大量分布于我国南部的优势蜱种,属于硬蜱家族,为三宿主蜱。根据实验室前期唾液腺转录组库的数据,设计引物,成功从半饱血成蜱唾液腺中扩增出镰形扇头蜱凋亡抑制分子(Rhipicephalus heamaphysaloides IAP,RhIAP)的基因编码序列,大小1887 bp,编码607个氨基酸,RhIAP的蛋白大小约66 kDa,有3个BIR结构域和一个RING指结构域。经由实时定量PCR方法检测了RhIAP在蜱不同发育时期(卵、幼蜱、若蜱、雌成蜱和雄成蜱)、不同器官(卵巢、中肠、唾液腺、脂肪体和血淋巴)和不同吸血状态的转录水平,结果显示RhIAP在蜱不同发育时期和组织器官均有表达。在吸血过程中RhIAP在唾液腺中的mRNA转录水平随着吸血总体呈现下降趋势。根据氨基酸序列,合成多肽免疫小鼠,制备了RhIAP多克隆抗体,成功识别了唾液腺中的天然RhIAP蛋白。选择原核表达系统,构建pGEX-4T-1/RhIAP重组表达质粒,成功诱导表达了GST融合RhIAP。将镰形扇头蜱半胱天冬蛋白酶分子RhCaspase7、8、9与之共同孵育,结果表明RhIAP可直接与RhCaspase7和RhCaspase8结合,证明RhIAP的作用机制可能是与Caspase结合使之失活来阻止凋亡发生。利用RNA干扰技术,通过浸泡法沉默了体外培养唾液腺的RhIAP,TUNNEL染色发现干扰组细胞的凋亡程度明显高于对照组。同时,对雌蜱进行显微注射双链RNA,接种兔耳上观察蜱的生物学特征,结果显示RhIAP沉默后对蜱吸血造成很大影响,饱血率为0。这些结果表明RhIAP是重要的抗蜱靶标分子,具有进一步应用价值。综合上述结果,本研究鉴定了一个镰形扇头蜱凋亡抑制分子RhIAP,发现它可以与RhCaspase7和RhCaspase8直接结合,通过合成双链RNA对其进行干扰,会加快唾液腺细胞凋亡,严重影响蜱的正常吸血。因此,RhIAP是蜱调控凋亡的关键分子,在蜱唾液腺和吸血过程中发挥重要作用,具有重要的应用潜力。