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目的:观察龙蛭汤含药血清（LZD）对过氧化氢（H2O2）诱导氧化应激条件下HUVECs自噬和凋亡的影响,探讨LZD促进HUVECs管型形成可能的分子机制。方法:参照血清药理学实验方法制备龙蛭汤含药血清和丁苯酞含药血清,体外构建H2O2诱导的HUVECs氧化应激自噬模型。实验一将网络药理学预测的龙蛭汤中药成分靶点与缺血性中风疾病作用靶点构建互作网络,将获得的预测靶点进行GO功能富集和KEGG富集通路分析。实验二分为1.Control组;2.空白血清组（BSG）;3.H2O2组;4.丁苯酞含药血清组（NBP）;5.LZD组;6.3-MA+H2O2组;7.3-MA+H2O2+LZD组;8.Rapa+H2O2组;9.Rapa+H2O2+LZD组。采用CCK-8、划痕实验、基质胶管型形成实验分别检测HUVECs的细胞增殖、细胞迁移及管型形成能力;细胞免疫荧光检测自噬荧光强度。各组通过RT-q PCR检测LC3II/I、Beclin-1、VEGF、mTOR m RNA表达,Western blot定量LC3 II/I、Beclin-1、Bcl-2、Bax、VEGF蛋白及磷酸化的PI3K、Akt蛋白。同时,通过应用RNA干扰技术,由慢病毒载体构建Sh RNA-Beclin-1沉默HUVECs的Beclin-1基因,研究PI3K/Akt/mTOR信号通路参与HUVECs的管型形成的分子调控机制。结果:（1）网络药理学分析结果显示龙蛭汤有145种化合物,经筛选后获得176个靶点,化合物成分-缺血性中风疾病-靶点网络预测共同作用靶点17个,其细胞学组分表达显著的是受体复合物、质膜蛋白复合物、神经元细胞膜,分子生物学功能主要是肽酶活性、氧化还原酶活性和激素结合,生物学过程涉及凋亡信号通路、激酶活性的正调控、调节凝血等。KEGG富集信号通路涉及PI3K/Akt信号通路、HIF-1信号通路、细胞因子介导的信号通路、对氧气水平的反应、正调控细胞迁移及血液循环等。（2）HUVECs存活细胞数随着H2O2作用时间的延长和浓度的增大而减少,具有时间和浓度依赖性。（3）与Control组相比,H2O2组细胞增殖率显著下降（P<0.05）;与H2O2相比,LZD与NBP组的细胞迁移数与迁移面积明显增多（P<0.05）;同时,管型结构内的细胞连接性较为完整,分支点增多,管型形成数显著增加（P<0.01）。（4）与3-MA与Rapa组相比,3-MA+LZD组与Rapa+LZD组的细胞增殖率提高（P<0.05）;且随着3-MA与Rapa浓度的增大,细胞增殖率提升的幅度越小。（5）Control组、3-MA组荧光强度最弱,H2O2组表现出明显的红色荧光强度,Rapa组的荧光强度最强。与3-MA组相比,3-MA+LZD组的荧光表达水平明显升高（P<0.01）;与Rapa组相比,Rapa+LZD组的荧光表达水平降低（P<0.05）。（6）与H2O2组相比,3-MA组的LC3II/I、Beclin-1蛋白表达水平降低,Bcl-2/Bax比值降低;3-MA+LZD组可逆转3-MA引起的LC3II/I、Beclin-1蛋白表达水平降低,同时升高Bcl-2/Bax比值（P<0.05）。Rapa组的LC3II/I、Beclin-1蛋白表达水平明显升高,Bcl-2/Bax比值明显降低;而Rapa+LZD组的自噬与凋亡蛋白水平下降,Bcl-2/Bax比值升高（P<0.05）。（7）分别与3-MA组、Rapa组相比,3-MA+LZD组与Rapa+LZD组p-PI3K、p-Akt、VEGF蛋白水平升高,mTOR、VEGF m RNA相对表达量明显提高（P<0.05）。（8）与H2O2组相比,3-MA组与Rapa组的细胞迁移数和划痕后迁移面积减少;3-MA+LZD组与Rapa+LZD组的细胞迁移数和划痕后迁移面积分别较3-MA组、Rapa组有明显的增多（P<0.05）。（9）与H2O2组相比,3-MA组与Rapa组管型数目减少,联合LZD共处理HUVECs后,管型数目减少的现象被反转（P0.05）。（11）Con-Beclin-1+H2O2组的p-PI3K、p-Akt和VEGF蛋白表达水平较低,加入LZD共同干预HUVECs后,可显著提高上述因子表达水平,此外,Beclin-1m RNA表达减少,mTOR、VEGF m RNA表达明显增多（P<0.05）。与Con-Beclin-1+H2O2+LZD组相比,Sh-Beclin-1+H2O2组和Sh-Beclin-1+H2O2+LZD组的p-PI3K、p-Akt和VEGF蛋白表达水平明显降低,Beclin-1、mTOR、VEGF m RNA表达也同时降低（P0.05）。结论:（1）基于网络药理学构建龙蛭汤化合物-缺血性中风疾病靶点网络,龙蛭汤可能通过作用于Akt-1、Bcl-2、ANGPT1、PTGS2等靶点,参与转导PI3K/Akt信号通路、HIF-1信号通路、对氧气水平的反应、凋亡等信号通路,调控细胞的增殖、迁移、凋亡和血管新生等生物学过程。（2）龙蛭汤含药血清可有效提高细胞增殖率,促进细胞迁移和管型形成。（3）龙蛭汤含药血清通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬因子,减轻细胞凋亡,上调VEGF水平,刺激血管新生因子激活的机制,促进HUVECs管型形成,其可能有潜在的双向调控自噬作用。