Hsa_circ_0001495在膀胱癌中影响细胞增殖与分化的机制研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kollisjordan
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目的:越来越多的证据表明,环状RNA(circRNA)代表着广泛而多样的内源性RNA,并且通过直接或间接介导基因的表达,在各类生物学过程中起着至关重要的作用。但是,circRNA在膀胱癌中的潜在机制仍然尚不明确。在我们的研究中发现hsa_circ_0001495在膀胱癌全转录组测序结果中明显高表达,我们推测hsa_circ_0001495可能影响了膀胱癌的发生与发展,因此,对其在膀胱癌组织中的表达水平以及膀胱癌细胞中的表达水平进行检测,分析其表达的临床意义,同时通过功能实验进一步研究其对膀胱癌产生影响的作用机制。研究方法:我们使用q RT-PCR检测hsa_circ_0001495在32对膀胱癌及其配对的癌旁组织中的相对表达情况,将临床资料与检测结果进行临床相关性分析。我们使用Sanger测序分析以及核酸外切酶消化实验鉴定hsa_circ_0001495的环状结构特性;通过核质分离实验和荧光原位杂交实验进行hsa_circ_0001495的亚细胞定位;使用生物信息学技术预测在膀胱癌中hsa_circ_0001495和miR-1184以及MAPK信号通路三者间的关系;用双荧光素酶报告基因检测实验来验证hsa_circ_0001495和miR-1184的靶向结合位点和结合作用,通过CCK8测定法、Edu及克隆形成实验明确hsa_circ_0001495对膀胱癌细胞增殖分化的影响。结果:hsa_circ_0001495是由CCNB1转录本的第6外显子和第7外显子剪接产生,主要定位于膀胱癌细胞胞浆中,并具有耐受核酸外切酶消化的特性。与配对的癌旁正常膀胱组织相比,膀胱癌组织中hsa_circ_0001495和CCNB1的高表达,而miR-1184的低表达。hsa_circ_0001495的高表达有助于膀胱癌早期诊断(AUC:0.739,敏感性:0.906,特异性:0.562),且与Grade分级(P=0.016)相关。hsa_circ_0001495促进了5637细胞和T24细胞的增殖活性、DNA复制合成能力和克隆形成能力。hsa_circ_0001495通过海绵作用靶向miR-1184,从而影响MAPK信号通路中ERK磷酸化、JUN磷酸化和JNK磷酸化的活化及其表达水平而最终促进膀胱癌的生长和进展。结论:hsa_circ_0001495可成为膀胱癌诊断或进展的潜在标志物。hsa_circ_0001495可以靶向miR-1184并抑制其表达通过MAPK信号通路促进膀胱癌的增殖和分化。
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