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研究目的:神经胶质瘤是(Glioma)颅内常见的恶性肿瘤,其侵入性生长的特性为手术治疗带来了巨大的挑战,由于血脑屏障的存在,许多化疗药物及靶向治疗药物也无法完全发挥疗效。Sema4D是Semaphorins信号家族的一员,依靠与跨膜蛋白Plexin-B1的结合发挥影响细胞框架稳定性、促进细胞迁移、诱导T细胞活化、影响B细胞存活、促进血管内皮细胞生成等作用,Sema4D与Plexin-B1的相互作用已被证实影响多种肿瘤细胞的迁移、增殖能力。VX15/2503是一种来源于人体的IGg4单克隆抗体,近年来被广泛应用于抗肿瘤治疗,目前在欧洲地区进行的I期临床实验中取得了令人欣喜的成果。VX15/2503作用于Sema4D与Plexin-B1之间的结合位点,竞争性抑制Sema4D与Plexin-B1的结合,从而起到抑制肿瘤细胞分散、远处转移的能力。毛囊神经嵴干细胞(hair follicle neural crest stem cells,hfNCSCs)位于皮肤内毛囊外根鞘的隆突区,是一种神经嵴来源的干细胞。多数哺乳动物毛囊分布广泛,所以对于hfNCSCs而言,取材的来源不是问题。毛囊隆突部相比于其他来源干细胞的的取材方法更为简便,便于开展大规模的细胞培养。而且,hfNCSCs来源于神经嵴结构,相比于其他成体干细胞要更为高级,所以其癌变倾向也更小。因其取材于本体毛囊,所以免疫反应性以及伦理学问题也相对较小。正因如此,hfNCSCs在基因治疗、组织工程、新药开发中可做为理想的种子细胞。本研究拟采用已构建好的载有VX15/2503基因序列的过表达慢病毒载体CD-100转染hfNCSCs,并对转染后细胞形态进行观察,初步鉴定转染后细胞表达产物,以期为胶质瘤的基因治疗提供一种新的思路。研究方法:(1)采用毛囊Bugle区组织块贴壁培养法对提取的毛囊神经嵴干细胞进行原代培养,在细胞传代后运用免疫荧光法对细胞类型进行鉴定。(2)采用吉凯基因化学技术有限公司构建的含有EGFP绿色荧光蛋白基因的CD-100过表达慢病毒载体对传代培养的毛囊神经嵴干细胞进行转染,倒置荧光显微镜下观察转染情况,并收集转染后细胞培养上清液。(3)对转染完成后细胞培养上清液进行酶联免疫吸附法鉴定其表达产物。结果:(1)从大鼠毛囊外根鞘Bugle区提取的组织块中培养出的毛囊神经嵴干细胞活性良好、细胞游出速度快、增殖能力强,细胞形态较多样,以细长梭型、三角形比较多见,免疫荧光鉴定显示Nestin、p75阳性。(2)对传代细胞进行慢病毒转染,倒置荧光显微镜下可见转染细胞绿色荧光蛋白显色清晰,细胞转染成功率高,转染后细胞活性受影响较小。(3)运用酶联免疫吸附法对转染后细胞培养上清液进行鉴定,结果显示实验组相比对照组蛋白表达量明显上调,初步证实转染成功且产物表达成功。结论:(1)大鼠毛囊外根鞘Bugle区提取的组织块可以培养出毛囊神经嵴干细胞。(2)基于单克隆抗体VX15/2503蛋白序列构建的CD-100过表达慢病毒载体可以成功转染毛囊神经嵴干细胞。(3)毛囊神经嵴干细胞被转染后可成功表达出具有单克隆抗体VX15/2503蛋白序列的产物。