白沙蒿病毒诱导基因沉默体系的探索与建立

来源 :兰州大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:HGameG
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白沙蒿(Artemisia sphaerocephala)为菊科蒿属沙生灌木,对荒漠生态系统的维持和恢复具有重要意义,同时其富含亚油酸、维生素E等,具有一定保健功效。随白沙蒿转录组测序的完成,对该物种基因功能的认知迫切。病毒诱导的基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术不需建立遗传转化体系,可快速验证植物基因功能,在非模式植物中被广泛应用。PDS(Phytoene desaturase,PDS)基因是合成类胡萝卜素的关键基因,该基因被沉默导致叶绿素合成途径被阻断,植物呈易分辨的“光漂白”表型,是探索VIGS体系的首选基因。本研究以白沙蒿为材料,选用烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)为载体,PDS为目标基因,构建正反向重组载体。以注射法(Injection method,I)、真空渗透(Vacuum infiltration,V)、真空渗透+超声波(Vacuum infiltration+ultrasonic,V+U)三种接种方法,OD600=0.5、0.8、1.0、1.5四种菌液浓度,将含有重组载体的农杆菌菌液对子叶期和真叶期幼苗分别各处理24组,探索VIGS体系在白沙蒿中的可行性。主要结果如下:(1)克隆得到441 bp白沙蒿PDS基因片段AsPDS-F和AsPDS-R,构建出TRV病毒的正反向重组载体pTRV2-AsPDS-F、pTRV2-AsPDS-R。(2)子叶期VIGS体系建立受接种方法、菌液浓度和靶基因插入方向的极显著影响。子叶期VIGS体系最佳处理组为V+U-1.5-R,白化程度达0.72,白化部位在第一、二对真叶处。(3)真叶期白沙蒿VIGS体系的建立,分别受接种方法和菌液浓度极显著和显著影响,靶基因插入方向对体系的建立无影响。真叶期白沙蒿VIGS最佳处理组为I-1.5-R,其白化程度为0.34,白化部位在第三、四对真叶处。(4)子叶期白沙蒿VIGS体系中14组处理产生阳性植株,白化程度总均值为0.15;真叶期5组处理产生阳性植株,白化程度总均值为0.05。子叶期产生的阳性植株和白化程度均优于真叶期。本研究在白沙蒿中建立了快速、高效的功能基因沉默体系,为后续该物种的基因功能研究提供了技术支撑。
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