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CD4+CD25+调节性T细胞因具有强大的免疫抑制能力在器官移植领域引起了广泛的关注,可能成为诱导器官移植后免疫耐受的有效手段之一,但由于可应用的细胞数量过少限制了其临床应用。模拟体内条件对其进行的体外扩增取得了一定的成果,但这种方法耗时长,费用昂贵,实验条件要求高而无法推广。Foxp3的发现为我们提供了另外一种选择,利用基因转染技术将Foxp3基因导入CD4+CD25-T淋巴细胞,能够使其获得与自然发生的CD4+CD25+调节性T细胞相似的细胞表型,以及与之相当的调节能力,使得获得足够的调节性T细胞成为一种可能。目的:通过逆转录病毒载体pLXSN介导小鼠Foxp3基因进入小鼠CD4+CD25-T细胞,使其转化为具有免疫抑制能力的调节性T细胞。研究此细胞体外抑制自身淋巴细胞增殖的能力,体内对小鼠异位心脏移植物存活的影响。方法:1.利用原始质粒pMD18-T-Foxp3构建Foxp3逆转录病毒体系pLXSN-Foxp3 -IRES2-EGFP,以PA317为包装细胞生产病毒上清,感染来自C57BL/6小鼠脾脏的CD4+CD25-T淋巴细胞,将Foxp3基因及报告基因EGFP同时引入靶细胞,通过观察EGFP的表达及流式细胞仪检测评价转染效率。2.将小鼠CD4+CD25+调节性T细胞、转染Foxp3基因的CD4+CD25-T淋巴细胞分别与同系小鼠脾脏分离得到的单个核细胞在CD3、CD28单克隆抗体、mIL-2存在的情况下进行混合培养,72小时后加入3H—TdR,继续培养18小时,测定cpm值,通过与空白对照组相比判断培养体系的增殖程度。3.建立小鼠器官移植模型:将Chen -z-h的小鼠颈部异位心脏移植模型术式进一步改进,以BALB/c小鼠为供体,C57BL/6小鼠为受体建立稳定可靠的小鼠异位心脏移植模型,为研究实体器官移植后排斥反应建立动物模型。4.将小鼠CD4+CD25+调节性T细胞、转染Foxp3基因的CD4+CD25-T淋巴细胞分别于术前一天输入受体小鼠(C57BL/6小鼠)体内,同过观察异位心脏移植物的病理表现、存活时间评价二者对小鼠异位心脏移植物存活的影响。