柠檬中黄酮类化合物和辛弗林的检测和含量特征分析

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柠檬(Citrus limon (L.) Burm.F.)属芸香科(Rutaceae)柑橘属常绿小乔木,主要栽培品种有尤里克、里斯本、费米耐劳等,是继橙,柑之后第三大柑橘品种,在鲜果市场和食品工业有巨大的商业价值。四川省安岳县是我国重要的柠檬商品生产基地,其产量、规模、市场占有率占全国80%以上。柠檬果实中含有的类黄酮、维生素、膳食纤维,香精油、类胡萝卜素和生物碱等成分具有抗氧化活性、抗癌、减肥、抗炎症、抗过敏及抗菌等重要生理功能,柠檬加工副产物中含有丰富的生物活性物质,是保健食品和动物饲料的来源。但目前国内针对柠檬香气成分、精油、胡萝卜素、类黄酮、膳食纤维等活性成分的研究较少,而且缺乏系统性,在工业化分离纯化技术和功能产品开发方面更是处于空白状态。因此,开展我国柠檬中类黄酮化合物和辛弗林的含量检测及分布特征研究,意义重大。本文研究了高效液相色谱法同时检测柠檬中13种类黄酮圣草枸橼苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、香风草甙、芦丁、地奥司明、柚皮苷元、橙皮素、甜橙黄酮、川皮苷、桔黄酮和生物碱辛弗林的方法,以四川省安岳县34个套袋/不套袋尤力克柠檬样品和中国国家柑橘种质资源圃23种柠檬资源品种的果皮、果汁、囊衣不同组织部位为试验材料,得出了柠檬果实中类黄酮和辛弗林的分布规律。主要结果如下:1、建立了同时检测柠檬中13种类黄酮(圣草枸橼苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、香风草甙、芦丁、地奥司明、柚皮苷元、橙皮素、甜橙黄酮、川皮苷、桔黄酮)和生物碱(辛弗林)的高效液相色谱法。样品用N,N-二甲基甲酰胺提取,watersXBridgeTMC18分析柱(4.6×250 mm,5μm),0.05%乙酸水溶液(含0.05%的十二烷基磺酸钠)和甲醇为流动相,梯度洗脱,二极管阵列检测器(283 nm,275 nm,340 nm)检测,115 min内能将14种成分完全分离:果皮的回收率80.61—117.38%,果汁的回收率81.33—116.65%,囊衣的回收率82.27—112.81%,相对标准偏差为0.21%—4.87%,黄酮类化合物最低检测限0.05—0.20 mg/kg,辛弗林检测限为5.0 mg/kg。结果表明该方法操作简单,具有较高的灵敏度和精密度,可满足柠檬和其他柑橘类水果的质量控制和品质检测的需要。2、系统分析了安岳尤力克柠檬的果皮、果汁、囊衣样品。结果表明,尤力克柠檬的的果皮、囊衣、果汁中的黄酮类物质种类相同,含量规律是果皮>囊衣>果汁,含量最高的类黄酮物质橙皮苷和圣草枸橼苷,果皮含量是4382.37 mg/kg和1217.07 mg/kg,囊衣含量是995.43mg/kg和1754.15 mg/kg,果汁含量是124.67 mg/kg和157.20 mg/kg,其次是地奥司明和芦丁,果皮含量是446.07 mg/kg和23.97 mg/kg,囊衣含量是235.46 mg/kg和37.64 mg/kg,果汁含量是23.10 mg/kg和8.81 mg/kg。这四种类黄酮占几乎总黄酮含量的95%以上。辛弗林在果皮,囊衣,果汁中的平均含量分别是224.06 mg/kg,49.18 mg/kg,150.27 mg/kg。此外有少量芸香柚皮苷,柚皮苷,新橙皮苷,香风草甙,柚皮苷元,橙皮素,川皮苷,桔黄酮检出。3、分析套袋和不套袋的尤力克柠檬的类黄酮,辛弗林和品质指标发现,套袋与否对果皮中圣草枸橼苷和芦丁的含量影响较大,套袋的柠檬果皮中圣草枸橼苷平均含量为1169.41mg/kg,不套袋的柠檬果皮中圣草枸橼苷含量增加到2789.77 mg/kg。套袋与否对柠檬的维生素C,可滴定酸,可溶性固形物,香精油和固酸比无显著影响,仅对柠檬的感官评级有影响。通过相关性分析发现,果汁中类黄酮和辛弗林含量受品质指标影响较大,囊衣次之,果皮中类黄酮和辛弗林含量受品质特征的影响最小。4、通过对23种柠檬资源品种的类黄酮和辛弗林研究发现,基因型对柠檬中类黄酮含量有巨大影响,不同品种柠檬果实的类黄酮和辛弗林含量差异显著。通过功能成分的分层聚类分析发现,果皮的功能成分聚类可以将柠檬与柠檬杂种有效分开。
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