利用碱化氯乙酸－异丙醇法制备了羧甲基化壳聚糖，收率87.8％，取代度 74.6%。利用氯磺酸吡啶法制备硫酸化壳聚糖收率110.67％，离子色谱法（IC）测定得 硫酸根含量33.95%，碱性多糖于环氧乙烷冰浴法制备羟乙基化壳聚糖，收率87％，通过红外光谱法分析确定了各取代基团的数量和位置。将羧甲基化壳聚糖、硫酸化壳聚糖、羟乙基化壳聚糖用于制备可调控释放时间的纳米药物载体，采用反相微乳化法，以胰蛋白酶为模式药物，按照衍生化壳聚糖比壳聚糖 1：3的比例混合样品，利用戊二醛为交联剂，十二烷基璜酸钠为乳化剂，分别制备了羧甲基化壳聚糖/壳聚糖、硫酸化壳聚糖/壳聚糖、羟乙基化壳聚糖/壳聚糖纳米药物控释体系，收率分别为75.33％，79％，79.67％，蛋白装载率为29.3％，24.7％，22.2％。通过红外光谱对比检测到羧甲基化壳聚糖为外包被存在。扫描电镜显示载体大小均一，在10-100um之间，可悬浮在水溶液中。体外崩解试验表明，样品在溶液中无明显暴释现象，6小时内蛋白释放率分别为57.1％，71.6％，70％，载体与酶之间通过共价键结合紧密，蛋白持续释放时间达24小时。体外崩解试验表明了衍生化壳聚糖/壳聚糖最佳比例为1:3，最佳交联剂浓度0.4％，通过调节衍生化壳聚糖/壳聚糖的比例，可有效调节载体崩解时间，达到控释作用。通过对载体酶物理和化学性质的研究，发现反相微乳化法固定胰蛋白酶，稳定性和耐受性都明显增加，固定化酶与底物结合能力无明显变化，米氏常数测定酶活性试验得出，羧甲基化壳聚糖/壳聚糖载体的Km =4.20x10-3mol/L，硫酸基化壳聚糖/壳聚糖载体的Km =3.87x10-3mol/L。羟乙基化壳聚糖/壳聚糖载体的米氏常数Km =3.92x10-3mol/L，相比于原酶的Km =3.40x10-3mol/L，固定化酶的与<WP=5>底物结合能力无明显变化.固定化胰蛋白酶热稳定性远高于原酶，80°C缓冲液中，衍生化壳聚糖/壳聚糖固定化酶在100分钟内都具有较强活性。固定化胰蛋白酶分子对pH 变化的耐受性明显增强，最适pH为8.0，在pH=6.0－9.0的范围内都保持了较高的催化活性, 载体固定化酶对变性剂耐受性增强，经过80％乙醇处理10min，均无明显活性变化。细胞培养试验未出现明显污染现象，证明制备载体的方法，符合用于细胞培养的无菌条件，固定化酶可以用于细胞培养中代替胰酶的作用，作用3分钟内细胞迅速脱落，与原酶近似，通过细胞计数比较，加入载体的HELA细胞生长正常，细胞状态良好，载体对HeLa 细胞增殖无任何不良影响。由生长曲线可以看出处理后的细胞继代后生长繁殖正常，说明固定化酶无明显的细胞毒性。